文档介绍：实验五
厌氧性细菌和分枝杆菌 ANAEROBES AND MYCOBACTERIUM
目的要求
熟悉破伤风梭菌(C. tetani)、产气荚膜梭菌(C. perfrigens )与肉毒梭菌(C. botulinum)形态及染***实验五
厌氧性细菌和分枝杆菌 ANAEROBES AND MYCOBACTERIUM
目的要求
熟悉破伤风梭菌(C. tetani)、产气荚膜梭菌(C. perfrigens )与肉毒梭菌(C. botulinum)形态及染***
熟悉厌氧培养方法（Anaerobic cultivation methods）
掌握抗酸染色法(Acid-fast stain)
1、破伤风梭菌(C. tetani) ：革兰阳性，菌体细长杆状，芽胞圆形，位于菌体顶端，大于菌体，使细菌呈鼓槌状。
一、厌氧芽胞梭菌的形态染色特征
2、产气荚膜梭菌（ C. perfrigens ）：革兰阳性，粗大杆状，芽胞椭圆形，位于菌体次极端，但体内标本不易看到芽胞，只见到四周有明显的荚膜。
3、肉毒梭菌（ C. botulinum ）：革兰阳性，短粗杆菌，芽胞椭圆形，位于次极端，大于菌体，使菌体呈网球拍状 。
1、厌氧培养方法分类：
物理法：厌氧袋法、厌氧缸法等
化学法：焦性没食子酸法等
生物法：庖肉培养法、共生法等
二、厌氧培养
2、厌氧培养试验（Anaerobic cultivation test）
实验材料：肉汤培养基、土块、凡士林
实验步骤：将土块放入肉汤培养基中 凡士林封于液面 37℃培养24h。
观察结果：下次实验课。
产气荚膜梭菌在牛乳培养基中能迅速分解乳糖产酸，凝固酪蛋白，产生大量气体又将凝固的酪蛋白冲散成海绵状碎块，并可将培养基表面的凡士林冲至试管塞处，气势汹涌。
3、汹涌发酵试验（ stormy fermentation test ）
结核病是一种严重危害人民健康的慢性传染病，目前全球有约20亿人被感染，每年新出现结核病患者约800-1000万，每年因结核病死亡人数约为200-300万。目前我国结核病年发病人数约为130万，因结核病死亡人数每年达13万，超过其它传染病死亡人数的总和。我国是全球22个结核病流行严重的国家之一，同时也是全球27个耐多药结核病流行严重的国家之一。我国结核病患病人数居世界第二位，仅次于印度。结核病是我国重点控制的重大疾病之一。
三、结核分枝杆菌及抗酸染色
1、分枝杆菌简介
三、结核分枝杆菌及抗酸染色
（1）分枝杆菌属细菌是一类细长、略弯曲，呈分枝生长趋势的杆菌。主要致病菌有结核分枝杆菌和麻风分枝杆菌。其中，结核分枝杆菌是引起结核病的主要病原体。
（2）结核分枝杆菌需氧生长，营养要求高且生长缓慢。
（3）结核分枝杆菌细胞壁含有大量脂质，一般不易着色，若经高温或延长染色时间而着色后能抵抗盐酸酒精的脱色。
固体培养基上菌落呈干燥、坚硬、颗粒状、乳白色或米黄色，不透明，表面皱纹状，形似花菜。
在液体培养基内呈表面生长，形成菌膜。
2、结核杆菌培养特性
3、结核分枝杆菌的检查程序：
直接涂片、抗酸染色镜检
痰液 接种于罗氏培养基
集菌处理
涂片染色镜检（抗酸染色或金***染色）
4、抗酸染色（acid-fast stain）
（一）实验材料
１、卡介苗或结核病人痰液
2、抗酸染色液等
（二）实验方法
１、用接种环取卡介苗2～3环。涂片、干燥和固定。
２、用抗酸染色法染色。
３、镜检。
（三）实验原理
结核分枝杆菌细胞壁含有大量脂质，一般不易着色，若经高温或延长染色时间而着色后能抵抗盐酸酒精的脱色。
【染液】 抗酸性染液（一）（石炭酸复红液 Carbon fuchsin ） 抗酸性染液（二）（3%盐酸酒精 3%Acid-alcohol ） 抗酸性染液（三）（碱性美兰液 Alkaline methylene blue ）
初染：将已固定的标本片用染色夹夹好，玻片上加一小块吸水纸片（防止染液流洒），然后滴加石炭酸复红染液，在酒精灯上微微加热，直到染液冒出蒸气为止（不可煮沸和煮干),及时补充染液,维持3~5min，水洗。
脱色：用3%盐酸酒精脱色30sec，脱色时应轻轻晃动玻片。水洗。
复染：滴加碱性美兰液复染1min，水洗。
用吸水纸吸干，镜检。
（四）操作步骤：
抗酸染色结果观察
5、革兰染色与抗酸染色比较
序号
步骤
染料
染色时间
1
初染