文档介绍：实验一硫酸铜标准曲线的制作一、目的与要求
1、掌握分光光度比色法的基本原理和应用；
2、熟悉标准曲线的意义及掌握制作方法；
3、了解光谱光度法技术的具体内容及应用；
4、了解回归分析法。
二、原理
光电比色法是根据溶液颜色深浅的浊，应重新配制。
应用标准液的配制：用5ml移液管，按下表要求，将硫酸铜贮备标准液用L硫酸在中号试管内稀释，摇匀，置阴凉处备用。
编亏
应用标准液浓度
（Hg/ml）
贮备标准液
(20000g/ml,ml)
L硫酸
(ml)
1
1000
2
2000
3
3000
4
4000
：分别从编号试管中，吸取硫酸铜应用标准液，加到光径1cm的比色杯中。用分光光度计，以L硫酸作空白调零点，在690nm波长处，测定1-4号试管中溶液的吸光度（A）;每一溶液重复测3次，取其平均值，以各试管浓度为横坐标，各试管溶液的吸光值为纵坐标，用坐标纸绘制出硫酸铜标准曲线。
：取未知硫酸铜溶液加入比色杯中（若过浓可稀释5-10倍），用分光光度计，在690nm波长处测定吸光度。以此吸光度值可在硫酸铜标准曲线上查出未知硫酸铜溶液的浓度。思考题：
标准曲线是如何设计的，有何临床意义未知硫酸铜溶液的浓度是如何求出的何谓回归分析法（库热西•玉努斯）
附：光谱光度法分析技术
利用各种化学物质所具有的发射、吸收或散射光谱谱系（带、线）的特征，来确定该物质的性质、结构和含量的技术称为光谱光度分析技术。
光谱光度分析技术包括发射光谱分析、吸收光谱分析和散射光谱分析三大类，与其对应的仪器列表如下（表1）:
表1光谱光度分析与其对应的仪器光谱分析类型对应仪器名称1、各种摄谱仪2、火焰光度法发射光谱3、原子荧光光谱仪4、荧光比色计1、各种光电比色计2、各种可见光区及紫外光区分光光度计吸收光谱3、各种红外光区分光光度计4、原子吸收分光光度计1、各种浊度计散射光谱2、各种乳光计3、各种生物光度计
生物体内有许多物质成分含量甚微，不能用重量分析法或溶量分析法去测定，而常用比色法来测定，该法灵敏、迅速、准确，是当前常用的一种定量分析法。
一、比色法原理
在原理上应用了有色溶
透过光的强度就会减弱。
。透过光的减弱也越
比色法是根据溶液颜色深浅的比较来测定物质含量的一种方法，液对光吸收的物理定律一一Lambert-Beer定律。
Lambert定律：
一束单色光线通过一有色溶液后，由于溶液吸收了一部分光能,若溶液的浓度不变，溶液的厚度越大（即在溶液中所经过的途径越长）显著。
玳线通这溶液升质示意图
若10=光线通过溶液前的强度（入射光强度）I=光线通过溶液后的强度（透过光强度）
b=溶液的厚度
则……①常数K1的数值随光线的波长和溶液的性质而改变。
Lambert定律适用于一切溶液（图2）。
Beer氏定律：
一束单色光线通过一有色溶液后，透过光线强度就会减弱。若溶液的厚度不变，则溶液的浓度越大，透过光线强度减弱就越显著。
若C部液的浓度
Beer氏定律并非适用于一切溶液，有的溶液若浓度改变，溶质的解离或聚合的程度也随着改变。
若两种溶液是由同一种物质配成，则ki=k2,合并①及②式：则得下式