文档介绍：琥珀酸脱氢酶的作用
及其竞争性抑制
生物化学与分子生物学系
陈园园
实 验 7
了解琥珀酸脱氢酶的作用及
酶促反应中的竞争性抑制作用
实 验 目 的
竞争性抑制作用
抑制剂和底物的结构琥珀酸脱氢酶的作用
及其竞争性抑制
生物化学与分子生物学系
陈园园
实 验 7
了解琥珀酸脱氢酶的作用及
酶促反应中的竞争性抑制作用
实 验 目 的
竞争性抑制作用
抑制剂和底物的结构相似，
能和酶的底物分子竞争
与酶的活性中心相结合，
从而阻碍酶与底物结合
形成中间产物。
酶活性位点
抑制程度取决于抑制剂和底物对酶的相对亲和力
以及抑制剂和底物浓度比。
加大底物浓度可减弱甚至解除抑制作用。
实 验 原 理
延胡索酸
琥珀酸
还原型甲烯蓝
(白)
琥珀酸脱氢酶
甲烯蓝
(蓝)
E + S ES E + P
琥珀酸
丙二酸
E
+
I
EI
琥珀酸脱氢酶
FAD FADH2
操 作 步 骤
1、酶提取液的制备
1~ g 兔肌肉(剪碎)＋海砂少许(1/3匙)
+2ml 磷酸盐缓冲液(1/15 mol/L)，研磨成糊状，
然后再加10ml 磷酸盐缓冲液(1/15 mol/L)混匀。
2、纱布过滤（双层）
3、取小试管五只，按书上P40表格加入各试剂。
最后加石蜡隔绝空气，37℃水浴保温。
每间隔10~15min观察一次结果，并记录。
注 意 事 项
注意区分肌肉与筋膜；
家兔肌肉必须充分剪碎碾磨，海砂不可加太多；
12 ml缓冲液要分次加入，不可一次性加入；
碾磨器械、纱布要及时清洗，纱布要洗干净晾干；
滴加试剂时，一定要看清试剂的名称和浓度；
滴加液体石蜡时沿着管壁倾斜加入，盖住液面即可；
观察结果时不能振摇试管，避免甲烯白重新氧化变蓝；
实验完成后试管要用皂粉清洗。
改良Mohum法测定 鼠肝谷-丙转氨酶(GPT)活性
实 验 22
实 验 目 的
掌握GPT活性测定的基本原理
熟悉GPT活性测定的具体操作方法
了解血清GPT活性测定的临床意义
实 验 原 理
GPT
2,4-二硝基苯
丙氨酸
***酸
-***戊二酸
谷氨酸
在520nm波长测定其光密度，与已知浓度的***酸溶液比较，即可计算谷-丙转氨酶的活性
***酸二硝基苯（碱性溶液中呈棕色）
血清谷-丙转氨酶活性单位
在pH 、37℃条件下，
每毫升肝匀浆与底物保温30min后，
g的***酸作为
1个谷-丙转氨酶的活性单位，
血清中GPT正常值为2-40 U/mL。
实 验 步 骤
标准管法测定酶活性：
1、取干燥试管4支，标号
测定管 对照管 标准管 空白管
2、依次加入试剂，混匀，37℃保温
3、呈色反应后，520nm比色测OD值
谷丙转氨酶活性单位/mL鼠肝匀浆 = ? U/ml
方法一：以空白管调0，测A测定、A标准、A对照
实 验 结 果
A测定
测定管中生成***酸的质量 = ——— × m标准
A标准
A对照
对照管中生成***酸的质量 = ——— × m标准
A标准
30min中生成***酸的质量 = m测定 – m对照
A测定-A对照
= ————— × m标准
A标准
30min生成***酸的质量 1
活性单位 = ———————————— · ——
g V测定
方法二：以空白管调0，测A'标准
以对照管调0，测A'测定
A'测定