文档介绍：实验二
毛细血管采血、微量吸管及改良牛鲍计数板使用及显微镜法红细胞计数
医学检验技术教研室
用
（一）目的：掌握改良牛鲍计数板结构及使用方法。
（二）原理：一定倍数稀释的血液或体液混匀后滴入具有固定体积和精密划分刻度的改良牛鲍计数板中，在显微镜下对所选择的区域中的细胞进行计数，在乘以稀释倍数，即可换算成单位体积内的细胞数。
（三）、实验用品
1、器材 改良牛鲍计数板、专用盖玻片、光学显微镜、绸布、微量吸管、带孔乳胶吸头、刻度吸管、试管。
2、试剂 红细胞稀释液
（四）标本：抗凝血
（五）操作
1、稀释血液 取试管1支，加红细胞稀释液2ml,加抗凝血10微升，立即混匀，制成红细胞悬液。
2、准备计数板 用绸布拭净改良牛鲍计数板和专业盖玻片，采用推式法从计数板下缘向前平推盖玻片，将其盖在计数池上。
3、冲池 用完了吸管吸取制备好的再次混匀的红细胞悬液，沿盖玻片与计数板之间的缝隙冲入计数池。充液量以恰好充满一侧计数池为宜，不可过多、过少或有气泡，否则需重新操作。
附：牛鲍计数板基本结构
血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大方格，中央的一大方格作为计数用，称为计数区。计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个中方格（大方格用三线隔开），而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个中方格（中方格之间用双线分开），而每个中方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。 计数区边长为1mm，则计数区的面积为lmm2，每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后，，，每个小方格的体积为1/4000mm3。
四、显微镜法红细胞计数
原理
用等渗稀释液将血液稀释一定的倍数后，滴入计数板，在显微镜下计数一定范围内红细胞数，经换算可求得每升血液中的红细胞数。
红细胞稀释液
Hayem液（赫姆氏红细胞稀释液 ）
枸橼酸钠稀释液
普通生理盐水或加1%甲醛的生理盐水
①Hayem液
主要成分及作用：
NaCl 调节渗透压；
Na2SO4 调节渗透压，提高比重防止细胞粘连；
HgCl2 防腐；
缺点：遇高球蛋白血症患者，由于蛋白质沉淀而使红细胞易凝集。
②枸橼酸钠稀释液
主要成分及作用：
NaCl 调节渗透压；
枸橼酸钠 调节渗透压，抗凝；
甲醛 防腐；
优点：配制简单，可使红细胞在稀释后较长时间保持正常形态并且不凝集，故应用较广。
③普通生理盐水或加1%甲醛的生理盐水
急时用。
【操作方法】
l、，放入一小试管内。
2、用微量吸管吸血至l0ul处。
3、擦去管尖外部余血将血液迅速轻轻吹入盛有红细胞稀释液的试管内，吸上清液嗽洗吸管2-3次，立即摇匀。
4、用微量吸管或玻棒取混悬液少量，充入计数池内。
5、待2—3分钟，让红细胞完全下沉后，将计数板平放在显微镜台上，用低倍镜观察，如红细胞分布均匀即可换高倍镜进行计数。
红细胞计数的区域:
中心大方格中的5个中方格(正中一个和四角各一个)。
充液位置
充液位置
为红细胞计数区域
计数原则:
数上不数下，数左不数右的计数原则 即凡压在中方格边线(双线)上的红细胞，只计上侧与左侧线上的细胞，而压在下侧与右侧线上者不计入。
压线细胞的计数原则：
数左不数右，数上不数下
【计算】
红细胞数/L=5个中方格内红细胞数×5×10×200×106 /L=5个中方格内红细胞数×1010 /L =5个中方格内RBC数/100×1012
式中:
×5: 5个中方格换算成1个大方格
×10: ，换算成 uL。
×200： 血液的稀释倍数
×106 : 由1uI换算成1L
例：，加血10ul，
混匀。充液，静置2～3min，计数中央大
方格内四角和正中五个中方格内的红细
胞，共600个，请计算红细胞计数结果。