文档介绍：选修一
生物技术实践
专题一 微生物的利用
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2．某种微生物数量的测定
3．培养基对微生物的选择作用
4．利用微生物发酵来生产特定的产物以及微生物在其他方面的应用。
杀死接种环上残存的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者
如图是微生物平板划线示意图，划线的顺序为12345。下列操作方法正确的是( )
A. 操作前不用做任何处理
B. 划线操作须在火焰上进行
C. 在5区域中才可以得到所需菌落
D. 在12345区域中划线前后都要对接种环灭菌
[解析] 每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，使下一次划线时接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目减少，以便得到菌落。划线后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。
[答案] D
1．筛选原理
配制选择培养基，把尿素作为培养基中的唯一氮源，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长，其他微生物则不能在此培养基上生长。
2．统计菌落数目
(1)理论依据：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。
(2)计算方法：每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M
其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数；V代表涂布平板时所用稀释液的体积(mL)；M代表稀释倍数。
(3)统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
(4)为使结果接近真实值，要设置重复组，取其平均值。可将同一稀释度的样品接种到三个或三个以上的平板上，经涂布、培养计算出菌落平均数。
3．设置对照
可排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
4．实验流程
(1)以尿素为唯一氮源的培养基作为实验组，制备牛肉膏蛋白胨培养基作为对照组，用来判断选择培养基是否具有选择作用。
(2)以培养基加土壤样品进行培养为实验组，培养基不加土壤样品进行培养为对照组，判断培养基是否被污染。
5．课题延伸
由于分离分解尿素的细菌的选择培养基上可能生长着以尿素分解菌代谢产物为氮源的其他微生物，因此还需借助生物化学方法对分离细菌作进一步鉴定。
(1)原理：细菌合成的脲酶将尿素分解成NH3，使培养基碱性增强，pH升高，因此，可通过检测pH的变化来判断该化学反应是否发生。
(2)方法：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌，若pH升高，则指示剂变红，说明该种菌能分解尿素。
下表为两种微生物的培养基配方
A组
KH2PO4
Na2HPO4
MgSO4·7H2O
葡萄糖
尿素
琼脂
g
g
g
g
g
g
B组
纤维
素粉
NaNO3
Na2HPO4
·7H2O
KH2PO4
MgSO4
·7H2O
KCl
酵母
膏
水解
酪素
5 g
1 g
g
g
g
g
g
g
上述两种培养基中的物质溶解后，均用蒸馏水定容至1000 mL。
(1)如果要对土壤中分解尿素的细菌进行分离，则需要选择上述哪种培养基？________，该培养基中的碳源是________，能分离尿素分解菌的原因是______________________。
(2)在分离尿素分解菌所用的培养基中可加入________指示剂，根据指示剂的颜色可鉴定某种细菌能否分解尿素，若有分解尿素的细菌，培养基将会呈现________。
(3)从功能上来看，上述两种培养基均属于________培养基；从物理性质来看，A属于________培养基。
[思路点拨]
[解析] 培养基A中，氮源只有尿素，所以只有能分解尿素的微生物才能从中获得氮源，分解尿素的细菌在分解尿素过程中产生氨，会使pH升高，酚红指示剂变红。因为培养基A中有凝固剂——琼脂，所以属于固体培养基。培养基B中，纤维素是唯一的碳源，所以也属于选择培养基。
[答案] (1)培养基A 葡萄糖 培养基中尿素为唯一氮源，只有能分解尿素的微生物才能生长繁殖
(2)酚红 红色 (3)选择 固体
1．筛选原理
即：可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。
2．实验流程
土壤取样：富含纤维素的环境
↓
选择培养：用选择培养基培养，以增加纤维素分解菌数量
↓
梯度稀释
↓
涂布平板：将样品涂布于鉴别培养基上
↓
挑选产生透明圈的菌落
3．两种常用刚