文档介绍：全日制专业学位硕士
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七苗北农公希枚大学
Northwest A & F University
研究生课程考试试卷
（课程名称：植物生物技术概论）
学位课0 选修课口
研究生年级：
2 0 13
级
姓名、学号：
化、组成结构、理化性质、生物活性、构效和量效关系进行全面系统的研究，既可为白芸豆a-淀粉酶抑制剂的保健产品开发提供理论基础和应用依据，也可为其它功能性糖蛋白的研究和开发提供方法借鉴。
本研究在现有研究的基础上，参考现有文献资料和糖蛋白分昌纯化的方法，确定最佳的a-淀粉酶抑制剂提纯工艺，并对白芸豆中的a-淀粉酶
抑制剂糖蛋白的超滤提取工艺进行研究，为将从白芸豆中提取、分离纯化的a-淀粉酶抑制剂作为减肥和治疗糖尿病的有效药物、保健品进行开发利用而提供有效的实验基础和应用依据，也为其规模化工业生产提供了技术参数。
研究设想
1、白芸豆中a-淀粉酶抑制剂的提取方法研究，确定最佳提取工艺并进行分离纯化
、用DNS比色法测定a-淀粉酶抑制剂的活性，在不同的吸收波长，不同的DNS试剂用量，不同的显色反应时间来确定对白芸豆中分离纯化的a-淀粉酶抑制剂的DNS比色法最佳条件。
、选择白芸豆籽粒粉碎粒度、料液比、NaCl溶液浓度以及乙醇浓这几个因素来考量其对所提取a-淀粉酶抑制剂含量的影响，为进一步的正交试验设计和最佳浸提工艺的确定提供参考。
、进行正交试验确定最佳工艺条件，并进行验证。
、对浸提工艺获得的白芸豆a-淀粉酶抑制剂粗品进行DEAE-Cellulose 离子交换树脂柱层析洗脱，获得白芸豆a-淀粉酶抑制剂样品，并测定抑制活性。
、通过Sephadex G-75凝胶柱层析对所提取的白芸豆a-淀粉酶抑制剂样品进行了进一步的分离纯化，获得了白芸豆a-淀粉酶抑制剂产品，并测定抑制活性。
2、白芸豆中a-淀粉酶抑制剂糖蛋白超滤提取工艺研究
(1)、采用有机超滤膜对白芸豆提取液中的a-淀粉酶抑制剂糖蛋白进行超滤浓缩，选用不同的节流分子量，操作压力，温度，物料质量分数，操作时间以确定最佳的提取条件,并测定活性提取率。
(2)、采用膜孔径为50nm的无机陶瓷膜对白芸豆提取液中的a-淀粉酶抑制剂糖蛋白进行超滤浓缩，选用不同的节流分子量，操作压力，温度，物料质量分数，操作时间以确定最佳的提取条件,并测定活性提取率。
(2)、对比以上两种方式，确定那种膜更适合于白芸豆中a-淀粉酶抑制剂糖蛋白的分离浓缩。
研究所需的方法
1、提取及分离纯化工艺路线研究
工艺路线E白芸豆一粉碎(过60目筛)一NaCl溶液浸提过夜一离心 (lOOOOrpm, 4°C)-上清70°C水浴一离心一乙醇醇沉一白芸豆a-AI粗品 —DEAE离子交换柱层析一Sephadex G75凝胶柱层析一收集蛋白峰一白芸豆a-淀粉酶抑制剂产品。
实验操作：白芸豆籽实粉碎之后过60目筛网，此原料1009按照料液比(W白芸豆/ VNacl)1：6加入1-5%NaCl溶液浸提过夜,离心(10 OOOrpm, 4°C)后取上清704°C水浴15min,然后离心获得上清液，经70%乙醇醇沉 (4°C),即获得白芸豆a-淀粉酶抑制剂粗品。然后经DEAE离子交换柱层析，0. 02mol / LpH6. 5的醋酸-醋酸钠