文档介绍：1 免疫印迹实验报告篇一:蛋白质免疫印记技术实验报告蛋白质免疫印迹技术曹学敏郭晓华谷中如古泽江河北大学生命科学学院 2010 生物技术河北保定 071002 摘要:目的:学****掌握动物抗血清的制备原理及技术,通过实际操作学会动物抗血清的制备, 掌握 Western - blottin g 的基本原理,熟悉 Western - blotting 的实验操作。方法:, 使用鸡卵类粘蛋白对小白鼠进行常规免疫,获得抗血清, 然后利用 Western - blotting 检测抗血清。结果: 纯化的鸡卵类粘蛋白能引起小鼠的免疫反应关键词:常规免疫抗血清免疫印记 Abstract : objective : learn to master the theory and technology of preparing animals ’ antiserum by operating the experiment in person ,learn to prepare the animals ’ antiserum , mastering the basic principles of Western - 2 blotting, and being familiar with the experiment operation of Western - blotting. Methods : using chicken ovomucoid operating the routine immunization of laboratory rat, and obtain the antiserum, then detecting the antiserum through Western - blotting. Result: purified chicken ovomucoid can lead to the immunization of laboratory rat Keywords: routine immunizationantiserum Western - blotting 前言免疫印迹(Western blotting) 是一种检测固定在固相基质上的蛋白质的免疫化学方法该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种常规技术, 是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。进行免疫之前必须具备可特异性识别目的蛋白质的单抗或多抗, 以及含有目的蛋白质的粗制或纯化的样品。因此, 免疫印迹可以从复杂抗原中检出特定的抗原或者从多克隆抗体中检出单克隆抗体, 又可以对转移到固相膜上的抗原或抗体进行连续分析, 以取得目的蛋白的定位、定性或定量。现在, 免疫印记技术, 在对人的病理研究上, 也有了很大的应用, 免疫印记法检测细胞中癌基因的表达及其意义。 1、试剂与器材小鼠的常规免疫与抗血清的制备所需试剂与器材 3 注射器蜗旋混合器纯化的鸡卵类粘蛋白苦味酸( 以 75% 乙醇配置)标记小鼠佐剂(完全佐剂不完全佐剂)酒精棉球冰箱离心机 Western Blot 12% 分离胶, % 浓缩胶马斯亮蓝脱色液 PVDF 膜甲醇电泳缓冲液封闭液( %BSA 、 TBST 溶液) 一抗(自制多克隆抗血清以 TBST 按 1:100 比例稀释) 二抗( 羊抗鼠,按 1:1000 比例用 TBST 稀释) DAB 显色液蒸馏水镊子烧杯海绵垫 2 方法小鼠的常规免疫和抗血清的制备(1 )抗原的提取与制备 1 )抗原为纯化的鸡卵类粘蛋白 2 )利用苦味酸(以 75% 乙醇配置)标记小鼠背部(2 )初级免疫:小鼠背部多点皮下注射, / 只小鼠 1 )抗原与佐剂的混合:取蛋白与完全佐剂混合,震荡混匀, 制成油包水的形态 2 )用酒精棉球消毒待注射部位 3 )皮下多点注射,每点注射量应小于初级免疫后仔细观察小鼠对外源抗原的反应, 两周后进行加强免疫 4 (3) 加强免疫: 小鼠背部多点皮下注射, / 只小鼠 1 )抗原与佐剂的混合:取蛋白与不完全佐剂混合震荡混匀,制成油包水的形态。 2 )用酒精棉球消毒待注射部位 3 )皮下多点注射,每点注射量应小于。(4) 第二次加强免疫: 加强免疫一周后进行。操作相同。(5 )收集抗血清(第二次加强免疫后一周后) 小鼠取血。收集的血液置于室温下 1h 左右, 凝固后,置4 ℃下,析出血清,离心, 3000rpm,10min 。吸出血清,分装( ~ ) ,贮于-20 ℃以下冰箱保存。 Western blotting 检测抗血清 1. 抗原 SDS-P