文档介绍：木瓜蛋白酶的固定化技术
木瓜蛋白酶是利用未成熟的番木瓜果实中的乳汁，采用现代生物工程技术提炼而成的纯天然生物酶制品。它是一种含疏基(-SH)肽链内切酶，具有蛋白酶和酯酶的活性，有较广泛的特异性，对动植物蛋白、多肽、酯、酰***等有较强的水解能木瓜蛋白酶的固定化技术
木瓜蛋白酶是利用未成熟的番木瓜果实中的乳汁，采用现代生物工程技术提炼而成的纯天然生物酶制品。它是一种含疏基(-SH)肽链内切酶，具有蛋白酶和酯酶的活性，有较广泛的特异性，对动植物蛋白、多肽、酯、酰***等有较强的水解能力，同时，还具有合成功能，能把蛋白水解物合成为类蛋白质。木瓜蛋白酶在医药 食品 日化品等行业方面有着广泛的应用。
固定化技术的优点：一、可以做成各种形状，如颗粒状、管状、膜状，装在反应槽中，便于取出，便于连续、反复使用。二、稳定性提高，不易失去活性，使用寿命延长。三、便于自动化操作，实现用电脑控制的连续生产。
采用固定化技术降低了生产成本，下面是对木瓜蛋白酶固定化的研究。
查阅文章:
Ⅰ.壳聚糖载体柔性固定化木瓜蛋白酶
魏荣卿、沈斌等
Ⅱ.微孔淀粉-海藻酸钠固定化木瓜蛋白酶的研究 金峰
Ⅲ.金属螯合载体定向固定化木瓜蛋白酶的研究 刘琳琳、曾力希等
一、壳聚糖载体柔性固定化木瓜蛋白酶
采用酶柔性固定化模型（在固定化载体上连上有足够长度且亲水的分子链，最后将酶结合到柔性链上），以壳聚糖为载体，双醛淀粉为柔性链，对木瓜蛋白酶进行柔性固定化。
实验材料及仪器：壳聚糖 可溶性淀粉 戊二醛 红外光谱仪 紫外分光光度计 酸度计 恒温震荡仪
试剂：Tris-Hcl缓冲液 酶液（以缓冲液配制）
固定化酶的制备流程：
以可溶性淀粉为原料制备双醛淀粉
固定化载体的制备（壳聚糖小球 Chitosan-DAS柔性载体 Chitosan-GA手臂载体）
固定化酶的制备（以柔性载体固定 以手臂载体固定）
酶活力的测定
固定化条件的优化：
由试验结果分析知：固定化酶技术使木瓜蛋白酶的活性明显提高。
由上图可知：固定化木瓜蛋白酶的最优化条件是：固定化温度为24℃，
二、微孔淀粉-海藻酸钠固定化木瓜蛋白酶的研究
采用微孔淀粉-海藻酸钠包埋法固定化木瓜蛋白酶（海藻酸钠与Ca+形成“蛋盒”模式，包埋木瓜蛋白酶）
实验材料与设备：木瓜蛋白酶 微孔淀粉
海藻酸钠 WL500CY高剪切乳化机
PHS-3B型PH计
T-6紫外可见光分光光度计
固定化酶的制备流程：
①将木瓜蛋白酶溶解于去离子水中，加一定量的微孔淀粉混合均匀，充分吸附后高速均质，待用
②海藻酸钠+50ml水，加热 溶解+10ml木瓜蛋白酶微孔淀粉混合液，搅拌均匀 用
5号注射器加在一定质量分数的***化钙溶液中，拉成管状 凝固3min 用蒸馏水洗涤数次，置于冰箱冷藏备用
③测定游离酶和固定酶的酶活力
结果与分析：
由以上三个图知：优化条件为最适微孔淀粉浓度为4%，最适海藻酸钠浓度为3%，最适***%
条件
游离酶
固定化酶
PH
温度
55℃
72℃
稳定性
机械强度增加，稳定性提高
易受其他因素的影响
酶反应动力学
三、金属螯合载体定向固定化木瓜蛋白酶的研究
以磁性金属螯合琼脂糖微球为载体，利用金属螯合配体（IDA-Cu+)与蛋白质表面供电子氨基酸相互作用的原理，定向固定了木瓜蛋白酶
实验材料与仪器：木瓜蛋白酶 盐酸半胱氨酸 亚氨基二乙酸 EDTA 四氧化三铁磁流体 琼脂糖
UV751GD型紫外可见光分光光度计 GFU-202C原子吸收分光光度计 85-2型恒温磁力搅拌器 AB204-E型电子分析天平 PB-10型酸度计
固定化酶流程：
载体的制备（磁性琼脂糖微球采用反相悬浮包埋法制备,然后加入IDA，最后加入***化铜制的琼脂糖-IDA-铜离子螯合载体） 酶的固定化（螯合载体+木瓜蛋白酶室温下震荡4h，用磷酸缓冲液洗涤数次） 测定酶活力 载体的再生