文档介绍：DB41
河 南 省 地 方 标 准
DB41/T 602—2009
蝴蝶兰组织培养技术规程
2009-12-01 发布 2009-12-30 实施
河南省质量技术监督局发布
为规范河南省境内蝴蝶兰的组织培养技术，结合我省生3果实采收
杂交后120d左右，当果实呈黄绿色时及时采收。
果实采收后，用流动水冲洗干净，移到超净工作台上，用75%酒精浸泡8min〜10min,再用10%漂 白粉溶液中浸lOmin,然后用无菌水冲洗4次〜5次。
4. 4接种
4. 4. 1花梗侧芽接种
在无菌纸上，用小刀切取0. 5cm~lcm的茎段，转接到配好的诱导培养基。
4. 4. 2无菌播种
将果实放在无菌纸上，用手术刀剖开果实取出粉状种胚，将消毒后的种胚均匀地播种到无菌播种培 养基上。
接种后1个月〜2个月培养物即可形成芽或原球茎,转接到芽继代培养培养基:MS+BA3 mg/L +NAAO. 2 mg/L +活性炭1. 5g/L+2%蔗糖+%琼脂,PH ： 5. 8或原球茎培养基上:花宝1号0. 5g/L、蛋白豚2. 0 g/L、 g/L、 g/L、 g/L、 g/L、琼脂7. 0 g/L, PH : 。以后即 发芽生根长叶。如要进一步扩繁，应在其发芽前把它切成小块进行转移，让它继续不断地形成原球茎球 状体。
6生根培养
把无根幼苗转接到生根培养基l/2MS+BAlmg/L+NAA0. 55mg/L+2%蔗糖+%琼脂，pH : 。
光照强度2000Lx,光照时间每天13h,保持恒温25°C +2°C。
参照附录C。
5炼苗移栽
1温室消毒
移栽前半个月，用1%的甲醛溶液对温室进行熏蒸消毒；用石灰水或高镒酸钾溶液对地面消毒；用高 镒酸钾溶液对工具浸泡消毒。
长出2〜3片叶子的生根苗即可进行炼苗。先将生根苗连同容器一起置于移栽设施中，放置1周，然 后打开瓶口再放置2d~3do
移栽前先将水草用1000倍的多菌灵或百菌清浸泡24h,使其充分吸收水分，然后用脱水机将其脱 水至手握无水下滴即可用于移栽。移栽时小心取出生根苗，用清水洗去根部粘附的培养基,用水草包住幼 苗根部移栽到穴盘中。
4环境要求
1空气湿度保持在80%-90%,遮光率50%,光照强度lOOOOLx左右，环境温度控制在22°C~26°C» 〜2个月的管理，待小苗长出1〜2对新叶时移栽到营养钵中。随着幼苗的生长,逐渐更 换大的营养钵。
，但水苔不能积水或过湿，防止烂根。每隔2周〜3周追1次稀薄 液体肥料，定期喷洒杀菌剂，预防病害发生。
附录A
(规范性附录)
MS基本培养基配制用量表
种类
成分
配1L母液称取量
(mg)
使用浓度
(mg/L)
配1L培养基吸取母液量
(ml)
大量元素
硝酸钾KN03
19000
1900
100
硝酸铉NHiNOs
16500
1650
磷酸二氢钾KH2PO4
1700
170
硫酸镁 MgSO,, 7H20
3700
370
氯化钙CaCL. 2H20
4400
440
微量元素
碘化钾KI
83
0. 83
10
硼酸H3B03
620
6. 2
硫酸镐 MnSOi. 4H20
2230
22. 3
硫酸锌 ZnSO4. 7 H20
860
钥酸钠 NazMoOi. 2 H20
25
硫酸铜 CuSO.,, 5 H20
2. 5
0. 025
氯化钻CoCL
2. 5
0. 025
铁盐
乙二胺四乙酸二钠 Na2. EDTA. 2 H20
3730
37. 3
10
硫酸亚铁FeSO,. 7H=0
2780
27. 8
有机物
肌醇
10000
100
10
甘氨酸
200
2
盐酸硫胺素/VB1
40
盐酸吐哆醇/VB6
50
0. 5
烟酸VB5或VPP
50
0. 5
调节物质
BA
50
依据各培养阶段取量
NAA
50
蔗糖
20000
20000
琼脂
7000
7000
pH
生根苗
商品苗
定植苗圃
容奖
命苗
附录B
（规范性附录）
蝴蝶兰组织培养工艺流程
速生培育
容器
无根芽苗
继代培养
常温冷却凝固
一
高压蒸汽灭菌
培养基分装 外植体制作 -
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