文档介绍：核酸检测基本知识
.什么是核酸检测
核酸的定义：核酸是由核昔酸或脱氧核昔酸通过3',
5'-磷酸二酯键连接而成的一类生物大分子。
DNA
End
group
DNA(doubk^trjnded)
Pho5ph>dieit,引物n与cDNA1火，在反转录酶作用下合成第2条DNAT补链。双链DNAT在T7RN麋合酶的作用下，经其启动子序列起动而转录RNARN双可在反转录酶的作用下反转录成DNA进入循环相，对模板进行大量
扩增。

TM股术原理与NASBAI本一致，略有不同之处是TM保I」用的是MML逆转录酶及T7RNA1合酶两种酶，MML辿转录酶既有逆转录酶的活性又具有RNASH活性。，可在1h内将RNA!板扩增约109倍。
(LCR)
LC幅基于靶分子依赖的寡核昔酸探针相互连接的一种
探针扩增技术，是继PC丽新发展的一种较有前景的体外扩
增技术。它的原理就是由2段寡核昔酸单链DN麻针与目标序列杂交，当该2段DN麻针与没有发生突变的模板褪火后,
如果2探针是紧邻的，中间没有核甘酸间隔，则可在连接酶作用下连接起来，连接以后的新链又可以作为模板，引导下一
周期的连接产生新的子链。若连接区段发生核甘酸的碱基突变，则连接反应不能发生，扩增反应终止。
(PCR)
PC破术的基本原理类似于DNA勺天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核昔酸引物。PCFfc变性
一退火一延伸三个基本反应步骤构成。
①模板DNA勺变性：模板DN恪加热至93c左右一定时间后，使模板DN破链或经PCIT增形成的双链DN廨离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备。
②模板DNAI引物白^退火(复性)：模板DN恪加热变性成单链后，温度降至55c左右，引物与模板DNAl链的互补序列配对结合。
③引物的延伸：DNA1板一引物结合物在TaqDN聚合酶的作用下，以dNT明反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成1条新的与模板DNAI互补的半保留复制链，重复循环变性一退火一延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次
循环的模板。每完成1个循环需2〜4min,2〜3h就能将待扩
目的基因扩增放大几百万倍。检测HIVRNA,需要先利用逆
转录反应将RNA专录为cDNA继而以cDNA?模板进行PORT增即可，这样的反应称为RT-PCR

实时荧光定量PC股术，是指在PC双应体系中加入荧光基团，利用荧光信号实时监测整个PCRS程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
本技术的原理是使用荧光基团标记探针，5'端标记荧
光基团R,3'端标记淬灭基团Q,在没有PCRT增时，由于荧光基团和淬灭基团空间距离很近，使荧光基团被淬灭，不发荧
光；而当PCRT增时，引物与荧光标记的特异性探针同时结合在模板上，荧光标记的探针与模板的结合位置位于上下游引物之间，利用Taq酶的5'3'外切酶活性，将荧光探针水解，荧光基团被释放由来，由于在空间上与淬灭基团分开，则发
由荧光。发生的荧光可以被荧光探头检测到，一边扩增，一
边检测，这样就实现了“实时”检测。该技术不仅实现了PC或半定量到定