文档介绍：原则蛋白曲线制作 原则蛋白曲线
原则曲线制作—考马斯亮蓝法测蛋白质含量
一、 原则曲线
一般用分光光度法测物质的含量，先要制作原则曲线，然后根据原则曲线查出所测物质的含量。因此，制作原则曲线是生物检测分析的一项基本技原则蛋白曲线制作 原则蛋白曲线
原则曲线制作—考马斯亮蓝法测蛋白质含量
一、 原则曲线
一般用分光光度法测物质的含量，先要制作原则曲线，然后根据原则曲线查出所测物质的含量。因此，制作原则曲线是生物检测分析的一项基本技术。
二、 蛋白质含量测定措施
1、 凯氏定氮法
2、 双缩脲法
3、 Folin-酚试剂法
4、 紫外吸取法
5、 考马斯亮蓝法
三、 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量—原则曲线制作
、试剂：
1、 考马斯亮蓝试剂：
考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，用蒸馏水稀释至1000ml,滤纸过滤。最后试剂中含%考马斯亮蓝G—250,%乙醇，%H3PO4。
2、 原则蛋白质溶液：
纯的牛血清血蛋白，预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，根据其纯度同/LNaCl配制成100ug/ml蛋白溶液。
、器材：
1、722S型分光光度计。
2、移液管。
、原则曲线制作：
试管编号 0 1 2 3 4 5 6
100ug/ml原则蛋白
/L NaCl
考马斯亮蓝试剂
摇匀，1h内以0号管为空白对照,在595nm处比色
1、A595nm
2、以A595nm为纵坐标，原则蛋白含量为横坐标，在坐标轴上绘制原则曲线。
1 、运用原则曲线查出回归方程。
2 、用公式计算回归方程。
3 、或用origin作图 ，测出回归线性方程。即A595nm=a×X+6 一般有关系数应过以上，至少2个9以上。
4 、绘图时近两使点在一条直线上，在直线上的点应当在直线两侧。
、蛋白质含量的测定：
样品即所测蛋白质含量样品，根据操作环节1操作，测出样品的A595nm，然后运用原则曲线或回归方程求出样品蛋白质含量。
一般被测样品的A595nm值在—之间，因此上述样品如果A595nm值太大，可以稀释后再测A595nm值，然后再计算。
、注意事项：
1、 玻璃仪器要洗涤干净。
2、 取量要对的。
3、 玻璃仪器要干燥，避免温度变化。
4、 对照：用被测物质以外的物质作空白对照。
药物的配制
一、药物的配制环节
、实验准备：
1、 准备所需的药物和玻璃仪器。
2、 洗涤。
、计算：
1、比例浓度计算：
1)、G/V比
例如配1% NaCl，称1g NaCl溶于100ml 水。
2 、V/V比：
例如配75%乙醇100ml，75%×100%=100%×X, X=75ml。取75ml无水乙醇，加25ml蒸馏水。
乙醇：***：***=2：1：2配500ml，各取200 ml，100 ml，200 ml混合。
3 G/V比：用的较少，如计算灰分中某种元素
如Fe的含量。
2、摩