文档介绍：（优选）醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质
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二、实验原理（一）
电泳：带电粒子在电场中向本身所带电荷相反的电极移动的现象。
电泳技术: 利用带电粒子在电场中移动速度不同而达到分离的技术。
第二页，共二（优选）醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质
第一页，共二十页。
二、实验原理（一）
电泳：带电粒子在电场中向本身所带电荷相反的电极移动的现象。
电泳技术: 利用带电粒子在电场中移动速度不同而达到分离的技术。
第二页，共二十页。
二、实验原理（二）
蛋白质是***电解质。，，电离成负离子，在电场中向正极泳动。
因血清中各种蛋白质的pI值不同，在同一pH缓冲液中带电荷量会有不同，此外，各蛋白质的分子大小和形状也不一致，所以在同一电场中，各蛋白质的电泳迁移率也不同。带电荷多、分子量小者，泳动较快，反之则慢。
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醋酸纤维薄膜电泳可将血清蛋白分成五条主要区带，从正极端起依次为清蛋白/白蛋白Alb， α1-球蛋白，α2-球蛋白，β-球蛋白, γ-球蛋白。这些蛋白经过染色处理，可展示出清晰的蛋白电泳图谱。如下图所示。
二、实验原理（三）
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由于染色时，染料与蛋白质的结合与蛋白质的量成正比。因此可将实验图片扫描后，根据每个蛋白条带的光密度，采用软件计算每种蛋白质的相对含量。
也可将各蛋白区带剪下，分别用一定量的NaOH稀溶液洗脱，进行比色，测出各蛋白质区带的相对含量。
二、实验原理（四）
蛋白定量：
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影响电泳的因素
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三、实验器材
卧式电泳槽
DYY-2型电泳仪
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醋酸纤维薄膜（CAM,2 cm×8cm）：1片/人。
染色缸1个，公用。
漂洗缸3个，公用。
点样器：公用。
滤纸：公用。
镊子：公用。
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脱色摇床
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扫描仪
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四、实验试剂
巴比妥-巴比妥钠缓冲液（，）
染色液（丽春红S染液）
漂洗液：3%（V/V）冰醋酸
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迎着光辨别醋酸纤维薄膜（CAM）的光面和毛面。
，用直尺和铅笔轻划一横线，做点样标记，并用铅笔标号。
将已经编号、标记的CAM膜以毛面朝下的方式浸入巴比妥缓冲液中，浸泡30 min。
五、实验操作
实验准备：
1）醋酸纤维薄膜的准备
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电泳装置由电泳槽和稳压电源两部分组成，两者之间有专门的连线连接。电泳槽的正负极各有一个装缓冲液的槽，红色为正极，黑色为负极。电泳槽置于水平台，两侧注入等量的巴比妥缓冲液，使其在同一水平面。用双层纱布搭桥。
2）电泳装置的准备
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1）用镊子取出浸透的薄膜，夹在两层粗滤纸内吸干多余的缓冲液，然后平铺在桌子上（毛面朝上）。
2）在一次性手套上滴一滴血清（3-5μl），用点样器在血清上蘸一下，再将点样器轻印在CAM膜的点样线上，待血清完全渗透到薄膜内后移开。

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1）将加样后的薄膜，毛面向下，垂直架于电泳槽的游杆两端，点样端置于负极，纱布将膜的两端与缓冲液连通
2）将电泳槽的正极和负极分别与电泳仪的正极、负极连接，打开电源，低压，平衡5min。调节电压至90-150V (110V),稳压电泳45min。
3）待电泳区带展开约25-35mm后，关闭电源。

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电泳完毕后，取出薄膜，以毛面朝下的方式浸于丽春红S染色液中，染色5-10min。

将染色过的薄膜依次放在漂洗缸1,2,3中漂洗，每次5 min

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将漂洗好的CAM薄膜放置在滤纸上，吸干水分，放入扫描仪中进行扫描，并用软件分析各种蛋白质的相对含量。

各组分蛋白%=AX/AT ×100%
AX:各组分蛋白光密度值
AT:血清各组分蛋白光密度值之和

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薄膜的浸润是电泳成败的关键之一。
点样时，应将薄膜表面多余的缓冲液用滤纸吸去，但不宜太干。
点样时，动作要轻、稳，用力不能太大。
电泳时应选择合适的电压，一般稳压在为110 V。
通电时，不得接触槽内的缓冲液或CAM，以防触电。
电泳槽缓冲液的液面要保持一定的高度，同时电泳槽两侧的液面应保持在同