文档介绍：（优选）醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白
第一页，共二十八页。
血清中含有清蛋白，α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白和各种脂蛋白等。各种蛋白质由于氨基酸组分、立体构象、分子量、等电点及形状不同，在电场中迁移速度不同。分子量小极与电泳仪的正、负极分别连接，注意不要接错。在室温下电泳，打开电源开关，（）。通电10-15min后，（8片共8mA），电泳时间约50-80min。电泳后调节旋扭使电流为零，关闭电泳仪切断电源。
第十二页，共二十八页。
图3-7 电泳装置剖视示意图
第十三页，共二十八页。
⑷ 染色与漂洗（血清蛋白染色与漂洗脱色）
4、染色与漂洗（血清蛋白染色与漂洗脱色）
用解剖镊子取出电泳后的薄膜，%氨基黑10B染色液的培养皿中，浸染5min，取出后再用漂洗液浸洗脱色，每隔10min 换漂洗液一次，连续数次，直至背景蓝色脱尽。
取出薄膜放在滤纸上，用吹风机的冷风将薄膜吹干。
第十四页，共二十八页。
图 3-8 血清蛋白与脂蛋白醋酸纤维素薄膜电泳图谱比较示意图
第十五页，共二十八页。
⑹ 结果判断与定量
6、结果判断与定量
一般血清蛋白电泳经蛋白染色后，可显示5条区带，其排列顺序见图3-8a，未经透明处理的电泳图谱可直接用于定量测定。
可采用洗脱法或光吸收扫描法，测定各蛋白组分相对百分含量。
第十六页，共二十八页。
本实验不要求进行定量分析，如有需要，可采用薄层扫描仪进行扫描定量，或采用洗脱后再进行比色的方法进行定量。下面为后者的具体操作步骤：
取试管6支，编好号码，，剪开薄膜上各条蛋白色带，另于空白部位剪一平均大小的薄膜条，将各条分别浸于上述试管内，不时摇动，使蓝色洗出。约半小时后，用分光光度计进行比色，波长用650nm，以空白薄膜条洗出液为空白对照，读取白蛋白A、α1、α2、β、γ球蛋白各管的光密度。
第十七页，共二十八页。
光密度总和T＝A+α1＋α2＋β＋γ
各部分蛋白质的分数为：
A（清蛋白）% = A / T×100
α1-球蛋白 % = α1 / T×100
α2-球蛋白 % =α2 / T×100
β-球蛋白 % = β / T×100
γ-球蛋白 % =γ / T×100
附：迁移率是胶体颗粒的一个物理常数，可用来鉴定蛋白质等物质以及研究它们的某些理化性质．现将人血浆蛋白质的等电点，迁移率等列于下表，供分析参考。
第十八页，共二十八页。
蛋白质名称
等电点
泳动脉/(cm2·V-1·S-1)
分子量
清蛋白
-×10-5
69000
α1-球蛋白
-×10-5
200000
α2-球蛋白
-×10-5
300000
β-球蛋白
-×10-5
9000-150000
γ-球蛋白
-
-×10-5
156000-300000
纤维蛋白元
-×10-5
正常值：白蛋白57～72% α1球蛋白2～5％
α2球蛋白4～9％ ～12％
γ球蛋白12～20％
表3-12 人血浆蛋白质的等电及迁移率
第十九页，共二十八页。
备注
备注：
①醋酸纤维薄膜电泳分析血清蛋白的正常结果不同于纸上电泳，主要是白蛋白偏高，个别正常人白蛋白仅超过70％。Α-，α-，和β，γ都偏低，个别正常人γ球蛋臼可低到12％左右。上述正常值仅供参考。
②经电泳，染色之干燥膜浸于冰醋酸：95％乙醇（2:8）溶液中20分钟，取出后将薄膜平贴于玻璃板上。干燥过程中，薄膜渐变透明。此透明薄膜可用扫描光密度计绘出电泳曲线，并可根据曲线的面积计算各组分的百分数。目前国内已有自动定量的光密度计生产。此透明薄膜可长期保存，供教学示教用。
第二十页，共二十八页。
【 注意事项】
5 注意事项 ⑴ 醋酸纤维素薄膜的预处理
⑴ 醋酸纤维素薄膜的预处理
薄膜的浸润与选膜是电泳成败的重要关键之一。将干膜片漂浮于电极缓冲液表面，其目的是选择膜片厚薄及均匀度，如漂浮15-30s时，膜片吸水不均匀，则有白色斑点或条纹，这提示膜片厚薄不均，应弃去不用，以免造成电泳后区带扭曲，界线不清，