文档介绍：细菌DNA的提取方法
针对一些不易于提取的细菌的方法：
试验试剂：
抽提缓冲液：
2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)
100mMTris-HCl
25mMEDTA
10MLiCl
2MLiCl
DEDS法制备
先用10ml含适当抗生素的GBM过夜培养Delftiasp.,第二天4000rpm离心10min收集菌体，用WashingTE（50mmol/LTris-HCl,10mmol/LEDTA）洗菌体2次，之后将菌体充分悬浮在5ml1XTEg冲液中，先后加入
5mg/L的蛋白酶、10%SDS轻轻混匀后50c放置3h~5h,接着用等体积的Tris饱和苯酚抽提2次，苯酚/***仿/异戊醇抽提一次，***仿抽提一次后，乙醇沉淀DNA,用自动移液器吸管头将絮状DNA沉淀块吸附到Ep管中，70%乙醇洗2次，干燥后溶于适当1XT豉ddH2O中。
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1）细菌培养：细菌接种于5ml液体培养基中，37c摇床（300rpm）培养过液。
2）细菌收集：取1ml培养物于EP管中，室温8000rpm离心5min,弃上清，沉淀重新悬浮于1mlTE（）
中（用ddH2O也行）。
3）菌体裂解：加入6gl50mg/ml的溶菌酶，37c作用2h。再力口2mol/LNaCl50%110%SDS110跖120mg/ml的蛋白酶K3gl50c作用3h或37c过夜。（此时菌液应为透明粘稠液体）
4）抽提：菌液均分到两个EP管，加等体积的酚：***仿：异戊醇（25:24：1）,混匀，室温放置5-10min。
12000rpm离心10min。抽提两次。（上清很粘稠，吸取时应小心，最好枪头尖应剪去）
5）沉淀：加倍体积的异丙醇，混匀，室温放置10min。12000rpm离心10min。
6）洗涤：沉淀用75%的乙醇洗涤。
7）抽（凉）干后，溶于50glddHO中，取2-5"电泳。作PCR模板用。
DNAEXTRACTIONPROCEDURE-GENERAL
Growcellsovernightin500mlbrothmedium.
Pelletcellsbycentrifugation,andresuspendin5ml50mMTris(pH,50mMEDTA.
Freezecellsuspensionat-20C
Addml250mMTris(pH,10mg/mllysozymetofrozensuspension,,placeonicefor45min.
Add1ml%SDS,50mMTris(pH,MEDTA,1mg/.
Extractwith6mlTris-equilibratedphenolandcentrifugeat10,(avoidinterface).Re-dothisstepifnecessary.
Addvol3MNaacetate(mixgently),thenadd2vol95%ethanol(mixbyinverting).
SpooloutDNAandtransf