文档介绍：第三次实验报告总结
实验报告包括实验目的、原理、操作、结果、结论与讨论五部分。
原理写得不完整。
电泳及影响因素；
血清中蛋白质主要有5种，由于蛋白质具有***解离，在pH=，各蛋白质带负电荷，在电泳质及体积选择合适的离心管。装载液体时要按各种离心机操作说明进行。无盖离心管不能装的太满。密封的或有盖离心管常要求装满，以免离心管变形。
2、检查离心管套筒是否完好、套筒内有没有软胶垫或棉花。
3、精确地平衡离心管及其内容物（配平）。
4、平衡后的离心管和内容物（包括套筒）应对称放置。
5、启动离心时离心速度由慢到快。
第十二页，共二十五页。
（五）检测蛋白质、 NH4+的方法
①检测蛋白质
缩二脲试剂：溶液显紫红色
20％磺柳酸 ：有白色沉淀产生
②检测NH4+
纳氏试剂：黄色或棕色
第十三页，共二十五页。
1、盐 析
2、透 析
3、层 析（脱盐）
4、检 测
第十四页，共二十五页。
1、盐析
取离心管一支加入血清2ml
加入2ml PBS，摇匀
(NH4)2SO4 2ml,摇匀
上清液（主要含清蛋白）倾入试管中
静置10分钟，再离心（2000转/分）10分钟
沉淀用1ml PBS搅拌溶解
逐滴加饱和(NH4)2SO4 ,摇匀
倾弃上清液（主要含α、β球蛋白）
沉淀即为初步纯化的γ－球蛋白
透 析
脱 盐
静置10分钟，再离心（2000转/分）10分钟
用于配平
用于配平
样品为猪血清
第十五页，共二十五页。
2、透析
清蛋白
换 水
①透析袋刚放入水中时,立即取袋外液体检查有无NH4＋；
②每隔4分钟检查一次，共3次，比较NH4＋透出的情况。
①，检查袋外液体的NH4＋情况；
②取袋外液2滴，置于小试管中，然后滴加20％磺柳酸1~2滴，观察有无沉淀产生。
水
水
第十六页，共二十五页。
3、层析
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
②上样
γ－球蛋白，PBS 10滴溶解
①装柱
装柱前用滤纸片堵住层析柱下口，防止下端玻纱堵塞
葡聚糖凝胶G－25，柱 高3/4~2/3柱长
流速：每分钟10滴左右
③加入洗脱剂
PBS 10ml
④收集
20滴换一支试管
第十七页，共二十五页。
⑤ 层析后洗脱液检测
每组两块比色板,洗净备用。
一块在各孔滴加纳氏试剂（检测NH4+）,另一块滴加缩二脲试剂（检测蛋白质）。若发现有显色反应此孔显色剂弃用。
检测蛋白及铵根离子不用滴管,避免污染,直接用试管倾倒。
用“-”表示无现象，用“+”, “++”, “+++”等表示颜色深浅。
⑥ 回收凝胶
第十八页，共二十五页。
(用+ -号表示，不写颜色)
表1. 层析后洗脱液的显色结果
表2. 透析后的袋外溶液显色结果
试管编号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
缩二脲试剂检测后现象
纳氏试剂检测后现象
检测次数
1
2
3
4
5
6
试 剂
纳氏试剂
纳氏试剂
纳氏试剂
纳氏试剂
纳氏试剂
20%磺柳酸
现 象
检测人： 时间：
检测人： 时间：
第十九页，共二十五页。
。
，是否漏水。
、无断层，无气泡，柱床面平整。
。
，不要破坏柱床面的平整。
，请用水清洗干净，防止试剂及被测样
品交叉污染。
，分工协作。
第二十页，共二十五页。
思考
？
？
为什么能够沉淀γ-球蛋白？
？
，沉淀中含有哪些物质？
？