文档介绍：微生物学实验104P
实验一 显微镜油镜的使用和细菌形态的观察
目的要求
显微镜油镜使用的原理
实验材料
实验程序
思考题
目 的 要 求
学****并掌握显微镜油镜的使用技术及维护的基本知识
使用油镜观察细菌的视野中央，再用拍
四、注意事项
载玻片要洁净无脂，否则菌液涂不开。涂片时，滴水不要过多，挑菌量宜少，菌膜宜薄
实验三 细菌的革兰氏染色法
一、目的要求
学****并掌握革兰氏染色的方法。
二、实验材料
：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金
黄色葡萄球菌。
：草酸铵结晶紫液、路哥氏碘
液、95%乙醇、番红液。
：显微镜、载玻片、接种环、酒
精灯、无菌生理盐水、香柏油、二甲
苯等。
三、基本原理
革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法。
1884年由丹麦医师Gram创立。
细菌先经碱性染料结晶紫染色，再经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌紫色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G-）。
为观察方便，脱色后再用一种红色染料，如碱性番红等进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。有芽孢的杆菌和绝大多数球菌，以及所有的放线菌和真菌都成革兰氏正反应；弧菌，螺旋体和大多数致病性的无芽孢杆菌都成负反应。
革兰式阳性菌和革兰氏阴性菌在化学组成和生理性质上有很多差别，染色反应不一样。
一般认为革兰氏阳性菌体内含有特殊的核蛋白质镁盐与多糖的复合物，它与碘和结晶紫的复合物结合很牢，不易脱色，阴性菌复合物结合程度低，吸附染料差，易脱色，这是染色反应的主要依据。
另外，与细菌细胞壁的化学组成及结构有关。
革兰氏阳性细菌由于细胞壁肽聚糖含量高，脂类含量低，乙醇处理使细胞壁脱水，肽聚糖层孔径变小，通透性降低，结晶紫碘复合物被保留在细胞内，细胞不被脱色。
革兰氏阴性菌细胞壁脂类物质含量高，肽聚糖含量较低，乙醇溶解了脂类物质，使细胞壁通透性增加，结晶紫——碘复合物易被抽出，于是被脱色。
再有阳性菌菌体等电点较阴性菌低，在相同pH条件下进行染色，阳性菌吸附碱性染料较多，因此不易脱去，阴性菌则相反。所以染色时的条件要严格控制。
四、方法与步骤
操作过程如下：
涂片→干燥→固定→草酸铵结晶紫染色（1min）→水洗→路哥氏碘液媒染（1min）→水洗→95%乙醇脱色（30s）→水洗→番红复染（1min）→水洗→干燥→镜检。
关键点：
严格掌握乙醇脱色程度，如脱色过度，则阳性菌被误染为阴性菌；而脱色不够时，阴性菌被误染为阳性菌。
菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间很长，或已死亡及部分自行溶解了，都常呈阴性反应。
五、实验内容
、枯草芽孢杆菌、金黄色葡
萄球菌分别进行革兰氏染色。
、枯草芽孢杆菌混合涂片进
行革兰氏染色。
大肠杆菌（G-）
枯草芽孢杆菌（G+）
金黄色葡萄球菌与大肠杆菌
六、实验思考题
、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄
球菌的形态图，注明放大倍数及颜色。
超过24小时？
？如果
不一致，试分析原因。
，怎样
才能确保你的操作正确，结果可靠？
实验四 放线菌、霉菌形态的观察
实验目的：
学****丝状微生物制片和染色技术；
观察和掌握典型放线菌、重要霉菌和酵母菌的形态结构特征
一、实验材料
1、细黄链霉菌5406平板、插片培养材料。
2、黑曲霉、青霉、毛霉平板培养材料和湿室培养材料。
3、黑根霉（面包霉）装片
4、酿酒酵母菌菌液
放线菌形态结构
是一类具有丝状分枝细胞的革兰氏阳性细菌，因菌落呈放射状而得名。
放线菌的形态和大小
放线菌呈分枝丝状
菌丝无隔膜，单细胞
菌丝直径与细菌相似，小于1微米
放线菌菌丝形态和功能
菌丝形态和功能的不同，放线菌菌丝可分为基内菌丝、气生菌丝和孢子丝三种
产生无性孢子是放线菌主要的繁殖方式。
问 题
如果按照细菌的制片方法观察放线菌，看到的情况如何？
如果要观察放线菌全貌，可采取什么方法？
放线菌的培养与观察方法
插片法-水封片法
玻璃纸法
压片法
影印法
霉菌的形态结构观察
霉菌（mould，mold）——凡生长在营养基质上形成绒毛状、蜘蛛网状或絮状菌丝体的小型真菌，统称为霉菌。
霉菌的营养体由分支或不分支的菌丝构成。许多菌丝相互交织形成菌丝体。
菌丝的大小：直径约为 2～ 10μm，在光学显微镜下，菌丝细胞呈管状。
霉菌的形态和大小