文档介绍：酶促反应动力学实验报告
********** 杨恩原
实验目的：
观察底物浓度对酶促反应速度的影响
观察抑制剂对酶促反应速度的影响
掌握用双倒数作图法测定碱性磷酸酶的Km值
实验原理：
一、底物浓度对酶促反应速度的影响
在
(3)
⑷
⑸
(6)
(7)
⑻
⑼
pH 10碳酸钠缓冲液(ml)

，37 €水浴保温5分钟左右。
酶液(ml)

0J
0」

0」
0」
pHW碳酸钠缓
冲液(ml)
0
10/16
10/14
10/12
10/10
10/8
10/6
10/4
10/2
加入酶液后立即计时，各管混匀后在37 °C准确保温15分钟。
保温结束， NaOH ml以中止反应。% 4-氨基安替 % ml。

NaOH(ml)
LO

L0

LO
%4-氨基安替比林(门⑴
L0
L0

EO
LO
0一5%铁貳化钾
(ml)
2,0
2,0

，放置10分钟，以管1为对照，于波长510 nm处比色。读取各管吸光度，做记录。(酶活性计算及Km值计算)
实验计算：
° C下保温15分钟产生1mg酚为1个酶活性单位，从标准曲线查出释放的酚量(ug),
以此计算处各管的酶活性(V)。
、1/S为横坐标，在坐标纸上作图，求出酶的Km值。
A
0
0. 197
0. 227

0. 290
0, 347
0, 407
6 471

V
0

9+ 729
10. 029
12. 429

20. 186

1/v
/
0. 118
1 103
0. 100
0+ 080
0, 067
0, 057
0, 050
0,037
1/S
/
1. 600
1. 400
1. 200
1. 000
0. 800
0. 600
0. 400
0. 200
Y=+, Km=
实验二:抑制剂对酶促反映的影响
，:
^管号
试剂
(1)
(2)
(3)
(4)
(5)
(6)
<7)
(8)
(9)
mol/L 基质
液(ml)
0
1
1
1
1
1
2
2
4
蒸帽水(ml)
4
7
6
5
4
3
4
2
0
，做酶促反应:
管号
试剂、、
1
2
3
4
5
6
7
8
9
吸収上表稀释
基庚液1ml
⑴