文档介绍：实验三PCR扩增
姓名：李宗翰 专业：环境工程 学号：1432999 同组人姓名：刘雪飞
一、 实验目的
复****PCR扩增的原理，熟悉PCR的操作流程。
二、 实验原理
PCR,即聚合酶链式反应，是一项在体外、短时间内大量扩增特定的实验三PCR扩增
姓名：李宗翰 专业：环境工程 学号：1432999 同组人姓名：刘雪飞
一、 实验目的
复****PCR扩增的原理，熟悉PCR的操作流程。
二、 实验原理
PCR,即聚合酶链式反应，是一项在体外、短时间内大量扩增特定的DN*** 段的分子生物学技术。以单链DNA为模板、4种dNTP为底物，在模板3,末端 有引物存在的情况下，用酶进行互补链的延伸。多次反复的循环能使微量的模板 DNA得到极大程度的扩增。
PCR包括三个过程：
、变性：目的双链DN***段在94°C下解链；
、退火：两种寡核昔酸引物在适当温度(50~60°C)下与模板上的目的序列通 过氢键配对；
、延伸：DNA模板一引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为 反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板 DNA链互补的半保留复制链。
重复循环变性-退火-延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这 种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2〜4分钟，2-3小时就能 将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
三、 实验仪器及材料
PCR 扩增仪，微量移液器 ~, -10 uL> 10-100 u L 三种)，Tip 头, 薄壁管， 离心管，TaqDNA 聚合酶，dNTP, buffer,引物(341FGC 和534r), 16S全长DNA样本。
四、 实验步骤
1、 用微量移液器分另U取 194uLddH2。、25 uLBuffe、10 uLdNTP、5 UL341FGC 引物、5 U L uL Taq ，混合均匀 后分装到
，每支管加入24 UL混合液。
2、 向第1~8支薄壁管分别加入1 UL样品模板，第9支管加入1 UL无菌水做阴 性对照。在薄壁管的盖子上写上组号及样品编号。
3、 将9支薄壁管放入PCR扩增仪中，设置好扩增条件：94°C 3min； 94°C 30s； 55°C 30s； 72°C 30s； 72°C 5min； 15°C。循环次数30-40o设置好后启动扩增 仪，开始扩增。
4、 将扩增的好的样品按下述步骤进行电泳实验：
、，放置微波炉中加热2min左 右，至混合液透明，取出室温下冷却。将混合液倒入FR-180E制胶器的槽中， 插入孔刷，注意不要有气泡。冷却一段时间，等胶凝固。
、取10 u L Loading Buffer染液，在铺平的塑料手套上均匀分成9份，再取 4uLPCR产物与染液混匀。将10 UL移液器调至6-7 uL,依次吸取上述混合液 滴，分别加入到1-9号胶孔中，第10号胶孔中加入4 UL的DL 2000 TM DNA Maekero
、，通100V电压。
、电泳半小时左右，可明显看出染液移动。将胶至于分析仪器内