文档介绍：药品微生物限度检查—— 控制菌检查
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菌种分离鉴定流程
增菌
分纯
初步鉴别试验
革兰染色
生化试验
酶类试验
抗生素敏感性试验（用于菌种鉴定）
全面鉴定
血清分型
***分析
基因分型
蛋白组分析
自动化仪器分析（生应
用试管法检查时，轻轻将试管倾斜，(动作勿大，防止江凝块摇碎)仔细观察
试验时间过长容易导致假阴性
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6 凝固酶试验的结果判定
阴性对照管血浆流动自如，阳性对照管液呈凝固状，试验管液呈凝固者为阳性反应；不凝固为阴性反应。阳性对照管和阴性对照管任何一管不符合要求时，应另制备血浆，重新试验
目前商品化的凝固酶试剂多家微生物相关制剂公司有售，试剂具有较好的稳定性、准确性
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7 生化试验
细菌鉴定的传统方法，参考方法
因为针对不同菌种，选择有针对性的生化试验进行，菌种不同所作的试验不同，药品检验中常用的种类不再一一介绍，所以在以后各菌种鉴定内容当中单独讨论
所有试验都需要已知阳性和阴性的菌株作为质控菌株，定期对试剂、培养基（包括培养基的灵敏度试验）以及试验操作过程进行质控试验，保证结果解释的准确性
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8 自动化仪器
优点：
包含的菌种的生物学特性测试试验种类更多，可以提高菌种鉴定的准确率
缩短菌种鉴定所需要的时间，为检品的快速检验提供保证
细菌鉴定的酶学技术以及近红外技术等其他鉴定方法应用的研究将为药品微生物鉴定提供更多的选择和便利
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B-D公司的phenix系统、生物梅里埃公司的VITEK系统等
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生化鉴定
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一、大肠杆菌检查法
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1 简述
大肠杆菌即大肠埃希菌（Escherichia coli），为肠杆菌科埃希菌属的模式种。埃希菌属除大肠埃希菌外，还有蟑螂埃希菌等四个种
大肠埃希菌是人和温血动物肠道内的栖居菌，随粪便排出体外。在药品中检出大肠杆菌，表明该样品受到人和温血动物的粪便污染，即可能污染肠道病原体。为保证人体健康，口服药品必须检查大肠杆菌
大肠埃希菌除普通大肠杆菌外尚有致病性大肠杆菌、产毒性大肠杆菌、溶血性大肠杆菌、侵袭性大肠杆菌等，可引起婴幼儿、***爆发性腹泻、结膜炎等病症
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2 对照用菌液
菌种为大肠杆菌［ＣＭＣＣ（Ｂ）44102］
对照菌液加入量含菌50～100cfu（）
制作方法：营养琼脂斜面培养物少许，接种至5ml营养肉汤培养基内，36±1℃培养18～24h后，％无菌***化钠溶液稀释至1：106
其用途：
做阳性对照
检查培养基灵敏度
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3 操作步骤
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增菌培养
取胆盐乳糖（ＢＬ）培养基3瓶，每瓶各100ml
2瓶分别加入规定量的供试液，其中1瓶加入含对照菌50～100个菌落形成单位的控制菌菌液作阳性对照，第3瓶加入与供试液等量的稀释剂作阴性对照
37℃培养18～24h（必要时可延至48h）。阴性对照应无菌生长。摇匀上述BL增菌培养液
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MUG试验原理
4-***伞形***葡糖苷酸（MUG）试验的原理MUG被β-葡糖苷酸酶（GUD）水解，产生荧光
实验证明96％的大肠杆菌含GUD，约10％的沙门菌属一些菌种也含有此酶。单一的MUG鉴别大肠杆菌其漏检率达6％，鉴于98％的大肠杆菌靛基质试验为阳性，故将MUG，靛基质试验结合，用EMB琼脂平板分离，辅以IMViC试验，在理论上可使大肠杆菌的检出率达99％
由于荧光反应的敏感度较颜色反应强千万倍，易于观察，没有主观性，因而用MUG鉴定大肠杆菌已被广泛应用于临床、食品、饮水、污水等的检测
MUG阳性（有荧光）、靛基质阳性（玫瑰红色）,MUG阴性（无荧光）、靛基质阴性（无色）
如MUG、I试验为阳性或阴性即可报告结果，如MUG与I试验不一致时，则需分离培养、革兰染色、镜检及生化试验鉴别
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MUG试验操作