文档介绍：实验三 非特异性反应、细胞免疫测定
1. 吞噬作用 示教
2. 溶菌酶实验 1个平板/组
3. 机体细胞免疫功能测定
E玫瑰花环实验 示教
淋巴母细胞转化实验 示教
4. 免疫细胞的分离与纯化——小鼠命 短,更新快 长
特点 应答迅速,在早期起主要作用 持续1-2天,是天然免疫晚期应答的主要
效应细胞
吞噬范围 主要是化脓性细菌 细菌、病毒、原虫、其他异物
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吞噬发生的最初1-2小时，吞噬细胞
趋化因子
聚集于微生物附近
粘附于微生物表面
吞入胞浆，形成吞噬体
一系列反应，杀灭微生物
吞噬过程
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实验方法：中性粒细胞的吞噬作用
金黄色葡萄球菌1-2ml，注入小白鼠腹腔内
5小时后，解剖，腹腔液涂片、染色
观察小吞噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌的现象
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中性粒细胞吞噬葡萄球菌
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实验方法：巨噬细胞的吞噬作用
10%鸡红细胞悬液注入小白鼠腹腔内
分别于1,6,24小时抽取腹腔液涂片、染色
观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象
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巨噬细胞吞噬鸡红细胞
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3、溶菌酶试验
溶菌酶是正常体液与分泌液中所含的一种低分子量的碱性蛋白质，主要来源于巨噬细胞，是天然免疫中一种重要的体液杀菌成分。
肽聚糖是细菌细胞壁中的重要成分，溶菌酶能够水解肽聚糖从而使细菌溶解。
细 革兰氏阳性：溶解
菌 革兰氏阴性：肽聚糖外面有一层脂多糖和脂蛋
白，一般情况下不受溶菌酶的影响。
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实验室准备：
（1） 带菌平板的准备：处理好溶壁微
球菌加入琼脂内,到平板,冷凝备用。
（2）每平板打4个小孔，如图。
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2
3
4
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同学们操作步骤：
清水漱口
将唾液涂于空平板中
用吸管吸出，按下图滴入孔内
37℃过夜
明天上午测量溶菌环的直径，记录分析
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2
3
4
PBS
阴性对照
鸡蛋清
阳性对照
1，4加入唾液标本
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二、E玫瑰花环形成实验
实验原理
T细胞表面标志CD2，即绵羊红细胞受体
绵羊红细胞表面CD58可与CD2结合
可用于T细胞的计数与分离
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三、T淋巴细胞转化实验
T细胞受到特异性抗原或非特异性丝裂原刺激时，可发生转化。
特异性抗原
非特异性丝裂原：PHA、ConA等。
正常人淋巴细胞受到PHA刺激后，其转化率为60-80%。
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转化细胞形态特征
细胞体积：增大
细胞核
大小：增大
染色质：疏松
核仁：清晰
有丝分裂：+/-
细胞浆
着色
空泡或伪足
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第二十一页，共三十八页。
第二十二页，共三十八页。
四、小鼠脾细胞的制备
目的要求
掌握分离制备小鼠脾细胞悬液的操作方法。
材料
动物：小鼠
RPMI-1640细胞培养液
Tris-NH4Cl红细胞裂解液
75%酒精
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1. 固定小鼠
[实验步骤]
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2. 暴露眼球
[实验步骤]
第二十五页，共三十八页。
3. 小镊子夹眼球放血，拉颈椎处死小鼠
[实验步骤]
第二十六页，共三十八页。
4. 剪开皮肤，暴露腹腔，找到脾脏
[实验步骤]
第二十七页，共三十八页。
5. 分离，摘除脾脏
[实验步骤]
第二十八页，共三十八页。
6-1. 冲洗脾脏
[实验步骤]
第二十九页，共三十八页。
6-2. 冲洗脾脏
[实验步骤]
第三十页，共三十八页。
7-1. 用注射器芯研磨脾脏，获得细胞悬液
[实验步骤]
第三十一页，共三十八页。
7-2. 用注射器芯研磨脾脏，获得细胞悬液
[实验步骤]
第三十二页，共三十八页。
8. 低速离心（2000转/分钟，10min）
[实验步骤]
第三十三页，共三十八页。
9-1. 离心后弃上清，留沉淀的