文档介绍：生物基因高表达载体必须具有如下调控元件：
①原核 DNA 序列，包括能在大肠杆菌中自身复制的复制子，便于筛选含萤组细菌
的抗生素抗性基躅，以及便于目的基因插入的限制性酶切位点。目前采州的哺乳动物细胞表
达戟体大都带 SV40 早期启动子和人 I 型 T 淋巴细胞病毒 LTR
中的增强子序列(R-U5 片段)组成的 SR-α启动子的活性均与 CMV-IE 相当；而由鸡β-肌动
蛋白启动子和 CMV 增强子序列构成的杂合启动子不仅活性比 CMV—IE 高，而且具有更为
广谱的宿主细胞范围。Novagen 公司的 pBacMam 表达系统即是以该杂合启动子驱动目的基
因的转录。另一类杂合启动子是由活性很低的启动子与数个转录激活因子结合位点串联而成，
这些位点与转录激活因子的结合受细胞外小分子药物的调控；这类启动子主要用作基因的诱
导表达。如 Invitrogen 公司的 ecdysone 诱导表达系统，其负责目的基因转录的启动子是由
热休克蛋白启动子核心序列(minimal promotor)和 5 个 E/GRE 元件组成；Clontech 公司开发
的 Tet-off 系统中的启动子则由 CMV 启动子的核心序列和 7 个 Tet 阻遏蛋白结合位点组成。
这些启动子在诱导前后活性可相差 4 个数量级。
另外，在哺乳动物细胞中已发现存在大量在低氧环境中可诱导转录的基因，如编码
红细胞生成素(EPO)转铁蛋 白、血红素加氧酶-1 等的基因，它们都有一个共同的顺式作用
元件(CGTG )，有利于在 5’或 3’侧翼区的低氧诱导低氧诱导作用因子-1(HIF-1)和低氧反
应增强子(HRE)结合，激活基因的转录，在低氧靶 浓度下可使重组蛋白大量表达。据报道红
细胞生成素启动子在 1%氧浓度比在 21%氧浓度下活陛 100 倍。这又是一种新的提高表
达量的作用机制。
2 宿主细胞
哺乳动物细胞表达外源蛋白最初是将抗体基因重新导人淋巴细胞中由病毒(如 SV40)
或 lgG 的启动子增强子引导。产生的抗体具有相应的结合能力和数应功能，但表达量很低。
常用的非淋巴细胞类有中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、小仓鼠肾(BHK)细胞、COS 细胞、
小鼠 NSO 胸腺瘤细胞和小鼠骨髓瘤 SP2/0 细胞等。不同宿主细胞表达的重组蛋白其稳定性
和蛋白糖基化类型不同，需根据要表达的目的蛋白选择最佳的宿主细胞。
COS 细胞是进行外源基因瞬时表达时用途最广的宿主，其重组载件易于组建，便于
使用，而且对插入 DNA 的量或者采用基因组 DNA 序列的情况都没有什么限制，便于通过
检测表达情况来