文档介绍：学****手册
《情境：浊度法》
引导文单元设计-实训指导书
子情境：引导文
浊度法
「七.. 阅读材料
二"材料一、浊度法
浊度法：可用来测量菌浓度•其原理是发酵罐中的发酵液按照一定的流速进 入流通式比色皿中，用500适菌龄，加大接种量，用与培养菌种相同组成的培养基。 有如，根据稳定期的生长规律，可知稳定期是产物的最佳收获期，也是最佳测定 期，通过对稳定期到来原因的研究还促进了连续培养原理的提出和工艺技术的创 建。
材料一、微生物生长量的测定
微生物特别是单细胞微生物，体积很小，个体生长很难测定，意义也不大。 通常测定微生物的生长是测群体的生长，而测定繁殖则都要建立在计数这一基础 上。
1测生长量
测定生长量的方法有许多种，适用于一切微生物。
它是一种较为粗放的方法，通常用于初步比较用。例如将待测培养液放在刻 度离心管中作自然沉降或进行一定时间的离心，然后观察沉降物的体积。
采用离心法或过滤法测定，一般干重为湿重的10%-20%。如用离心法，将待 测培养液离心，再用清水洗涤离心1-5次后干燥，可用105°C、100°C或红外线 烘干，也可在较低的温度（80C或40C）下进行真空干燥，然后称干重。如细 菌一个细胞一般重10-12-10-13g。如为丝状真菌可用滤纸过滤，细菌可用醋酸纤维 膜等滤膜进行过滤。过滤后，细胞可用少量水洗涤，再真空干燥（40C以下）， 称干重。以乳酸菌为例，在液体培养基中，细胞的浓度大约为2X108个/ml。100 ml培养物可得10-70mg干重的细胞。
与生长量相平行的生理指标很多，它们均可用作生长测定的相对值。
1） %, %，%。总氮量与细胞粗蛋白的含量（因其中包括了杂环 氮和氧化型氮）的关系可用下式计算：
粗蛋白总量二含氮量％
含氮量的测定方法有很多，常用凯氏定氮法。此法适用于细胞浓度较高的样 品，同时操作过程也较麻烦，主要用于科学研究中。
2） 含碳量的测定微生物新陈代谢的结果，必然要消耗或产生一定量的物质， 以表示微生物的生长量。一般生长旺盛时消耗的物质就多，或者积累的某种代谢 产物也多。将少量生物材料混入1ml水或无机缓冲液中，用2ml 2%重铭酸钾溶 液在100°C下加热30分钟，冷却后，加水稀释至5ml，在580nm波长下测定光密 度值（用试剂作空白对照，并用标准样品作标准曲线），即可推算出生长量。
3） 其它磷、DNA、RNA、ATP和N-乙酰胞壁酸等的含量，以及产酸、产气、 产CO2 （用标记葡萄糖作基质）、耗氧、粘度和产热等指标，均可用于生长量的 测定。
.2比浊法
微生物在液体培养基中生长，由于原生质含量的增加，引起培养物混浊度的 增高。最古老的比浊法是采用McFarland比浊管，用不同浓度的BaCl2与稀H2SO4 配制成的10支试管，其中形成的BaSO4有10个梯度，表示10个相对的细菌浓 度（预先用相应的细菌测定）。某一未知浓度的菌液在透射光下用肉眼与某一比 浊管进行比较，如果两者的浊度相当，即可目测出该菌液的大致浓度。
精确的测定，要用分光光度计进行。在可见光的450〜650nm波长内均可测定。
2计数法
计数法即是计算微生物繁殖出的个体数目，此法适宜于单细胞状态的微生物 或丝状微生物所产生的孢子。
直接法即是在显微镜下直接观察细胞并进行计数的方法，其计数结果是包括 死细胞在内的总菌数。
是一种粗放的计数方法。将已知颗粒（例如霉菌的孢子或红细胞等）浓度的 液体与待测细胞浓度的菌液按一定比例均匀混合，然后镜检各自的数目，求出未 知菌液中的细胞浓度。
计数一定容积中的细胞总数的常用方法，此法对细胞较大的酵母菌较为适 用。详细方法见实验指导书。
是一种活菌计数法，其原理是活菌在液体培养基中生长繁殖使液体混浊，在 固体培养基表面形成菌落，然后计数活菌的方法。
是一种常用的食品中细菌总数的计数法，有标准方法将待测样品稀释，然后 取适宜的稀释度样品与固体培养基混匀，凝固后培养，然后计数平板上出现的菌 落数乘以样品的稀释度，即可计算出样品的含菌数。也可用涂布法将稀释样品接 种在凝固的平板培养基上，后续方法同前。此法的优点是检测的结果较为精确， 缺点是方法烦琐，获得检测结果的时间长。
对未知样品作10倍系列稀释。选适宜的3个连续的10倍稀释液各取5ml， 接种到3组共1