文档介绍：PCR 实验报告
7 月 19 日 高遄
实验目的：了解 PCR 技术原理，掌握最基础的 PCR 实验步骤。
实验试剂：模板 DNA，Mg2+，buffer，dNTPs，Taq DN被不断重复。经多次循环之后，反应混合物中所含有的双
链 DNA 分子数，即两条引物结合位点之间的 DNA 区段的拷贝数，理论上的最高值应
该是 2^n，能进一步满足遗传分析的需要。
试剂作用：
（1） 引物：DNA 复制的起始点，针对复制 DNA 片段的两，端 有 5’引物和 3’引物
（2） Taq DNA 聚合酶：促进 dNTPs 与模板结合。
（3） Buffer：Tris-HCl 反应缓冲液，Taq DNA 聚合酶提供一个最适酶催反应条件。
（4） Mg2+：对 PCR 扩增效率影响很大，浓度过高可降低 PCR 扩增的特异性，浓度过低则
影响 PCR 扩增产量甚至使 PCR 扩增失败而不出扩增条带。
（5） dNTPs：底物，在引物引导下合成与模板互补的 DNA 新链。
（6） 石蜡油：防止 PCR 加热过程中 DNA 蒸发。
试剂配置体积：
20μl 体系中各试剂配置如下表：
试剂 H2O Buffer Mg2+ dNTPs P（引物） T（模板） E（酶）
体积/μl 9 2 2 4 2 1
温度和时间：
（1） 热启动：94℃，5~10min
（2） 变性：94℃，45~60s。
（3） 退火：50~65℃，1min。退火温度计算：Tm-（5℃~10℃），Tm（解链温度）=4（G+C）
+2（A+T）。
（4） 延伸：72℃，1~。
（5） 步骤（2）~（4）热循环 25~30 个周期
（6） 保温：延伸 72℃，10min
产物检测：凝胶电泳。实验步骤：
（1）设计 20μl 体系各试剂配比：
试剂 H2O Buffer Mg2+ dNTPs P（引物） T（模板） E（酶）
体积/μl 9 2 2 4 2 1
（2）按照预先设计的 20μl 体积配置 6 管试管量，实际加入量如下表
试剂 H2O Buffer Mg2+ dNTPs P（引物） T（模板） E（酶）
6x 加入 54 12 12 暂不加入 12 暂不加入