文档介绍:葡萄糖氧化酶
葡萄糖氧化酶(Glucoseoxidase,,简称GOD)能够在有氧气的条件下专一性催化β-D-葡萄糖生成葡萄糖酸和过氧化氢,其主要成分为β-D-葡萄糖氧化还原酶,辅基为黄素腺嘌呤二核苷它的主要作用也是去除啤酒中溶解的氧。因为啤酒中氧气的存在一方面会导致啤酒的色泽加深以及氧化变质,还会为微生物的成长提供便利条件,降低保存期。通过添加无毒副的葡萄糖氧化酶可以明显降低啤酒的老化,延长其保存期。葡萄糖氧化酶在果汁保鲜和茶叶保鲜以及对虾保鲜等中的应用原理与上相同。在小麦粉和玉米粉中添加葡萄糖氧化酶可以提高面粉的筋力,其作用是通过葡萄糖氧化酶在氧化过程中产生的过氧化氢氧化了面筋蛋白中的巯基,形成二硫键,增强了面团的网状结构形成的。
-2 葡萄糖氧化酶在饲料中的应用
葡萄糖氧化酶早在1999年就被国家农业部批准为12种允许使用的饲料添加剂之一,饲料中添加的葡萄糖氧化酶具有抗氧化的作用,能够清楚牲畜在应激状态时肠道上皮细胞产生的大量自由基,保护肠道上皮细胞的完整。在胃肠道中葡萄糖氧化酶不断的氧化葡萄糖成葡萄糖酸,降低了肠道的pH值,偏酸性环境更有利于保持各种消化酶的生物活性,有助于饲料的消化。同时偏酸性的环境也有利于益生菌的生长繁殖,使其处于优势地位,从而抑制了病原微生物的存活,提高了牲畜自身的免疫力。葡萄糖氧化酶能够抑制多种霉菌,对黄曲霉毒素B中毒有很好的预防效果,葡萄糖氧化酶不仅能与抗生素等抗菌药物配伍,而且还有协同药物提高疗效的作用,能够耐受质粒高温。随着葡萄糖氧化酶制备提纯工艺的不断发展完善,使用成本的不断降低,葡萄糖氧化酶将在畜牧行业中发挥越来越重要的作用。
一.(1)葡萄糖氧化酶粗酶液的获得:①高含量的葡萄糖氧化酶发酵液获取:挑取长满可产葡萄糖氧化酶点的青霉菌菌苔,在一级培养基中30~32℃振荡培养24h;然后以2~3%接种量 接种于二级培养基中,30~32℃振荡培养24h;最后以2~3%接种量接种于内有三级培养基的发酵罐中,控制溶氧为60%以上,~,发酵36~;②发酵液离心浓缩处理:对发酵液进行离心处理,8000rpm,20min,收取上清液,微滤去除残留的微小颗粒及菌体,超滤浓缩,直至酶活达到20U以上的葡萄糖氧化酶发酵;(2)葡萄糖氧化酶的提纯及脱盐:4℃条件下,向超滤浓缩酶 液体中缓缓加入硫酸铵固体颗粒,直至形成90%硫酸铵溶液,盐析4~6h,12000r/min离心得沉淀,-HCl缓冲溶液收取沉淀蛋白,加去离子水稀释8~10倍,超滤脱盐浓缩处理;(3)形成葡萄糖氧化酶冻干成品:加入保护剂于-20℃条件下冷冻真空干燥48小时,即得到葡萄糖氧化酶冻干品。
二.
(1)以橘青霉(Penicillium citrinum Thom.)为出发菌株,用无菌水进行洗脱,稀释得到橘青霉孢子悬液;(2)挑取步骤(1)获得的橘青霉孢子悬液接种于斜面培养基,置于恒温箱中放大培养,培养条件为:28~32℃,2~5天;(3)将步骤(2)培养得到菌种用无菌水进行洗脱,得到孢子悬浮液;(4)挑取步骤(3)获得孢子悬浮液接种于固体发酵培养基,接种量为10%~20%(v/v),将固体发酵培养基置于摇床中震荡培养,可得到葡萄糖氧化酶发酵液。(5)将发酵液进行离心、超滤浓缩除盐,得到葡萄糖氧化酶粗酶液;(6)将步骤(5)所得粗酶液经甲醇、丙酮相结合二次沉淀,过滤,滤饼冻干,即得到葡萄糖氧化酶制品。
食品科技方面:工业发酵微生物教育部重点实验室天津科技大学生物工程学院的贺玉兰,毛淑红,魏萍萍,路福平四位导师在2015年4月20日发表了《葡萄糖氧化酶与过氧化氢酶的共固定化研究》这一文章,研究了环氧树脂在共固定化葡萄糖氧化酶(GOD)和过氧化氢酶(CAT)中的应用,利用筛选出固定化效果最好的环氧树脂ES-4,考察加酶量、p H及磷酸钠缓冲液离子浓度对共固定化效果的影响。结果表明:共固定化的最佳条件是:GOD m L、CAT m L、磷酸钠缓冲液p 、 mol/L,固定24 h后固定化葡萄糖氧化酶酶活回收率为35%,过氧化氢酶酶活回收率为43%。连续操作15批次后,酶活力仍能保持初始酶活的73%。该研究为工业化利用固定化酶生产葡萄糖酸钠提供了新的思路。
动物营养学方面:中国农业科学院畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室和北京市饲料监察所的邢焕,孙春阳,栾素军,萨仁娜,张宏福,丁美芳六位导师在2015年4月15日发表了题名为《葡萄糖氧化酶和酵母硒混合添加剂对肉鸡生产性能和免疫指标的影响》的文章,本文旨在研究以葡萄糖氧化酶和酵母硒为主要成分的混合添加剂