文档介绍：核酸检测基本知识
：核酸是由核昔酸或脱氧核
苷酸通过5'-磷酸二酯键连接而成的一类生物大分子。
核酸具有非常重要的生物功能，主要是贮存遗传信息和传
递遗传信息。

核酸大分子可分录RNA, RNA又可在反转录酶的作用下反转录成DNA,进入循环相，对模板进行大量扩增。
转录介导的扩增技术
TMA技术原理与NASBA基本一致，略有不同之处是TMA利用的是MMLV逆转录酶及T7RNA聚合酶两种酶，MMLV逆转录酶既有逆转录酶的活性又具有RNA酶H活性。 C进行,可在1h内将RNA模板扩增约109倍。
连接酶酶促链式反应(LCR)
LCR是基于靶分子依赖的寡核苷酸探针相互连接的一种
探针扩增技术，是继PCR后新发展的一种较有前景的体外扩增技术。它的原理就是由2段寡核苷酸单链DNA探针与目标序列杂交，当该2段DNA探针与没有发生突变的模板褪火后，
如果2探针是紧邻的，中间没有核昔酸间隔，则可在连接酶作用下连接起来，连接以后的新链又可以作为模板，引导下一周期的连接产生新的子链。若连接区段发生核昔酸的碱基突变，则连接反应不能发生，扩增反应终止。
多聚酶链反应检测法(PCR) PCR技术的基本原理类似于 DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。 PCR由变性
—退火一延伸三个基本反应步骤构成。
模板DNA的变性：模板DNA经加热至93C左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备。
模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55C左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。
引物的延伸：DNA模板一引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成
1条新的与模板DNA链互补的半保留复制链，重复循环变性一退火一延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成1个循环需2- 4min , 2一3h就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。检测HIV RNA，需要先利用逆转录反应将RNA转录为cDNA,继而以cDNA为模板进行PCR扩增即可，这样的反应称为RT- PCR。
实时荧光定量PCR技术
实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
本技术的原理是使用荧光基团标记探针，5 '端标记荧光基团 R,3 7端标记淬灭基团Q,在没有PCR扩增时，由于荧光基团和淬灭基团空间距离很近，使荧光基团被淬灭，不发荧光;而当PCR 扩增时，引物与荧光标记的特异性探针同时结合在模板上，荧光标记的探针与模板的结合位置位于上下游引物之间，利用Taq酶的 5' 3'外切酶活性，将荧光探针水解，荧光基团被释放出来，由于在空间上与淬灭基团分开，则发出荧光。发出的荧光可以被荧光探头检测到，一边扩增，一边检测，这样就实现了 “实时”检测。该技术不仅实现了 PCR从半定量到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性强