文档介绍：正交试验设计法筛选印度块菌液体培养基
 
 
马欣燕+王国正+郭成金
Reference： 为筛选出印度块菌（Tuber indicum）最适用的液体培养基，以印度块菌菌丝体生物量为测量指标，采用L9（3。
碳源、氮源培养基正交试验 依据碳、氮源单因素试验结果，以菌丝体干质量均值为标准，分别选择2个均值较高的碳源、氮源，按L9（34）设计4因素3水平正交试验进行复选， g/L KH2PO4、 g/L MgSO4·7H2O、 g/L维生素B1 组成9组试验配方，正交试验因素与水平设计见表1。
无机盐及维生素水平试验 根据混合碳、氮源正交试验结果，选出最佳碳源、氮源组合为基础培养基，再向其中添加不同浓度配比的KH2PO4 、 MgSO4·7H2O和维生素B1，具体处理见表2。
2 结果与分析
不同碳素营养对印度块菌菌丝体生长的影响
碳源是蕈菌培养基的主要营养成分之一，也是蕈菌菌丝细胞碳架结构、生长以及代谢的重要能量物质来源[13]。一些蕈菌相关研究表明，碳源主要对细胞生长和活性生物成分的合成有较大影响[14-15]。从表3可以看出，印度块菌对5种碳源均有不同程度的利用，以菌丝生物量为标准来看，其中麦芽糖的利用率最高，葡萄糖次之，乳糖最差。由表4可见，，F>F4，10，=[16]，表明不同碳源培养基对印度块菌菌丝体生物量的
影响在α=，依据印度块菌菌丝生物量大小，选择麦芽糖、葡萄糖进行碳氮源正交试验。
不同氮素营养对印度块菌菌丝体生长的影响
氮源是食用菌细胞合成蛋白质和核酸必不可少的主要原料[17]。经前人试验表明，蕈菌对有机氮和无机氮均可利用且对前者的利用率高于后者[18-19]。为了全面详细地研究氮源对印度块菌菌丝体的影响，笔者对有机氮和无机氮的使用都进行了探索。试验结果表明，氮源对印度块菌菌丝体生物量的影响有一定差异。以酵母浸粉为氮源的培养基生物量最大，以***铵为氮源的培养基生物量最小。有机氮源中以酵母浸粉为氮源的培养基菌丝体生物量最高，蛋白胨次之，麦麸最差；而无机氮源中以硫酸铵为氮源的培养基菌丝体生物量要高于***铵氮源的。一般的NH4+盐比NO3-盐优先被利用，NO3-进入细胞后需要还原成NH4+后才能参与细胞物质合成[20]。方差分析（表5、表6）表明，印度块菌对氮源的利用存在显著差异，且酵母浸粉、蛋白胨要优于其他3种氮源，因此选择酵母浸粉、蛋白胨进行碳氮源正交试验。
正交试验结果与分析
由正交试验结果和极差分析（表7）可知，影响印度块菌菌丝生物量的大小关系为A>B>C>D。极差越大，各因素在水平变动时对生物量变化的影响就越大[21-22]。因此可知，葡萄糖是影响印度块菌菌丝生物量的主要因素。k1、k2、k3之间的差异是由因素取不同水平所引起，且k值相对较大的因素水平是较好的培养条件[23]。依据水平之间k值大小可知，印度块菌最佳液体培养基组合为A3B3C3D1， g/L葡萄糖， g/L麦芽糖， g/L蛋白胨， g/L酵母浸粉。
不同无机盐和维生素B1浓度对印度块菌菌丝生物量的影响
无机盐中矿质元素、维生素B1的存在及浓度均对新陈代谢过程起着重要作用[13]，两者比例大小会对于菌丝生长起到促进或延缓的作用[23-24]。为了完善培养基，使其营养均衡，对无机盐、维生素B1的浓度也进行了筛选，结果见表8。表9方差分析结果表明，不同处理间差异极显著。其中无机盐、维生素B1浓度的最佳组合为处理3，即 g/L KH2PO4、 g/L MgSO4·7H2O、 g/L维生素B1。
通过对最终所获得的印度块菌最佳液体培养基配方进行3次重复试验， g/L。
摇瓶培养前后印度块菌菌丝量和形态对比
以最终获得的印度块菌最佳液体培养基配方进行验证试验，从图1、图2可以看出，印度块菌在摇瓶培养前后菌丝量对比差异明显。摇瓶培养前，静置48 h后的培养基清澈透亮，印度块菌菌片漂于培养上或沉于瓶底，菌片上有绒状、极短的新生菌丝（图1）。摇瓶培养120 h后，培养基浑浊，可观察到有大小不一的菌丝球和絮状菌丝，瓶壁内侧有白色绒状气生菌丝（图2）。
3 结论
通过单因素试验、正交试验相结合的研究方法得出印度
块菌最适液体培养基，为今后印度块菌液体发酵活性物质提取提供理论依据，从而更加有效地利用这一珍贵的蕈菌资源。最终获得的印度块菌最适液体培养基配方： g/L葡萄糖， g/L麦芽糖， g/L蛋白胨，