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植物生长调节剂对紫霞黄栌组织培养的影响.docx

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文档介绍:植物生长调节剂对紫霞黄栌组织培养的影响
 

 
吴凡+赵蓓蓓+王浩
Reference:以紫霞黄栌(Cotinus coggygria var. ‘Zixia)为材料,组培紫霞黄栌外植体,获得最适宜紫霞黄栌的组培条件,得到一sue culture; modified MS medium
紫霞黄栌(Cotinus coggygria var. ‘Zixia)是漆树科(Anacardiaceae)黄栌属(Cotinus spp.)落叶小乔木或灌木。紫霞黄栌品种是黄栌的实生苗中发现的变异株,其当年生嫩芽、叶片和枝条在整个生长季呈紫红色,并保留了黄栌树种耐寒、耐旱、耐瘠薄和耐碱性土壤的生长特性[1],当年苗高可达1 m左右,可运用于园林工程进行块状和带状种植,其长大成苗后可在庭院中孤植,也可在绿地中群植。紫霞黄栌观赏性佳,环境适应性强,应用范围广泛,其景观效果壮观,是良好的具有北京市绿化植物潜力的彩叶树种资源[2]。然而,紫霞黄栌作为黄栌的变异株,苗木数量少,扦插繁殖成活率低,从而大大限制了其生产效率。
组织培养是良种苗木快速繁育的有效途径[3]。张永红[4]、李彧[5]、苗青等[6]都对黄栌属或漆树科植物进行过组培研究报道。但是通过实践探究发现,黄栌和美国红栌的组织培养技术并不完全适用于紫霞黄栌的扩繁增殖,主要存在问题有外植体消毒困难、污染率高、增殖阶段增殖系数低、褐化现象严重、继代培养困难、生根阶段生根率低[7-11]。国内鲜见对紫霞黄栌进行组织培养方式快繁的研究,本研究通过探究消毒方法、培养基配方和生长调节剂对紫霞黄栌外植体组织培养的影响,旨在筛选出一整套最适宜紫霞黄栌外植体组织培养的条件,提高其快繁效率,为北京市提供大量优质的彩叶绿化资源。endprint
1 材料与方法
1.1 材料
紫霞黄栌苗木材料由北京市黄垡苗圃提供,分别剪取生长健康、长势良好的成年植株上的一年生嫩枝、芽和二年生硬枝作为材料。获得紫霞黄栌无菌外植体的方法:实生苗一年生枝条和二年生枝条均使用75%乙醇灭菌30 s后用无菌水冲净,HgCl2处理8 min。组培室培养条件均为温度25 ℃,光照时间16 h/d,光照度2 000 lx。
1.2 药品和设备
6-BA、NAA、IAA、2,4-D等药品采购于Sigma aldrich公司;SW-CJ-2D超净工作台,苏州智净净化设备公司;YS-CZ-DD单人超净工作台、YS-LED-18照明灯管:易生石木(北京)生物科技有限公司。SYQ-DSX-280A高温高压灭菌锅:上海申安医疗器械厂。PLT-250培养瓶:济南普朗特生物科技公司。
1.3 试验方法
1.3.1 诱导分化培养基设计 诱导分化培养基采用MS基础培养基,分别选取1.0、1.5、2.0 mg/L 6-BA,0.1、0.5、1.0、1.5、2.0 mg/L NAA,采用双因素随机区组试验设计法(表1),添加30 mg/L蔗糖,6 g/L琼脂并将pH调至5.7,将灭菌后的外植体材料接入诱导分化培养基,每个处理接10个外植体,平行重复3次。
1.3.2 继代增殖培养基础培养基选择 将诱导分化后的外植体分别接入DKW、WPM、MS、1/2 MS、MS改良基础培养基,并添加1.0 mg/L 6-BA、0.1 mg/L NAA、30 g/L蔗糖、6 g/L琼脂,pH調至5.7,每个处理接10个外植体,平行重复3次。
1.3.3 培养基pH对外植体增殖的影响 选用改良MS培养基作为基础培养基,添加1.0 mg/L 6-BA,0.1 mg/L NAA,30 g/L蔗糖,6 g/L琼脂,pH分别调至4.5、4.8、5.1、5.4、5.7、6.0。
1.3.4 继代培养基添加不同植物生长调节剂正交试验 根据正交试验设计表[12]设计四因素四水平正交试验,分别选取0、1、10、100 μmol/L 4种浓度水平的6-BA、NAA、IAA、2,4-D 4种植物生长调节剂。将紫霞黄栌无菌外植体茎段接入MS改良培养基,并按照表1添加不同浓度生长调节剂,30 g/L蔗糖,琼脂6 g/L,调节pH至5.6~5.8。每瓶接种1个茎段,每个处理共接10个外植体,平行重复3次。
1.3.5 生根培养基设计 将长势良好的紫霞黄栌外植体转入MS改良培养基中,添加30 g/L蔗糖,6 g/L琼脂,pH调至5.4,然后分别添加0.1、0.2 mg/L NAA,0.1、0.2、0 mg/L IBA进行双因素随机区组生根培养试验,每个处理接10个外植体,平行重复3次。培养30 d对比生根情况。
1.3.6 生根苗移栽 取出生根的紫霞黄栌组培苗,洗净培养基,栽入营养钵中,基质为珍珠岩,生根苗温室温度控制在25 ℃,空气相对湿度90%,移栽后30 d统计成活率。

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上传人:科技星球 2022/6/22 文件大小:35 KB

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