HCV核酸定量检测.pptx

文档介绍：丙型肝炎病毒
核酸
定量
检测技术
PCR
fluorescence quantitative
Got you
thinking?
Hepatitis丙型肝炎病毒
核酸
定量
检测技术
PCR
fluorescence quantitative
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Hepatitis C Virus的基因结构
3’UTR有多聚U区域(poly U)及1段高度保守的98个碱基的区域，称为X-tail。不同基因型的HCV的多聚U有不同的长度。
3’UTR末端150个核苷酸序列(包括多聚U区和3’X-tail)含有HCV复制所必需的33’顺式复制元件，可能作为启动子来起始负链RNA的合成。
W
e
t
h
i
k
n
5′UTR 进行序列信息比对
中国大陆HCV感染的趋势：中国大陆HCV流行基因型主要为1，2，3和6型，没有发现4和5基因型。中国大陆地区最常见的基因型为1b和2a，%%，其次为3a，6a，3b，6n和1a。基因3型和6型的地理分布越来越广。
常用的技术
荧光染料法
荧光探针法
Real-time quantitative PCR
定量检测常用方法
改进建议
TaqMan®/ TaqMan-MGB®
SYBR Green I
Molecular Beacon
绝对定量
标准曲线由已知浓度的RNA、质粒或合成的寡链核酸生成
定量未知模板
标准样品和未知样品同时反应
先用特异性引物（反向）进行反转录扩增，再以合成的cDNA为模板，以特异性引物（正、反向）进行 PCR 反应
Rotor-Gene Q Instruments