丹参药材超高效液相色谱指纹图谱研究.docx

文档介绍：丹参药材超高效液相色谱指纹图谱研究

　　刘梅，夏鑫华，侴桂新，王峥涛
　　摘要 目的建立丹参药材中水溶性成分丹酚酸类和脂溶性成分丹参酮类的超高效液相(UPLC)指纹图谱措施，为丹参的质量控制提供迅速、科学的措施。措施以Acqui
　　222原则品溶液的制备取对照品丹参素钠、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A、二氢丹参酮I、丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮IIA适量，精密称定，置同一容量瓶中，用甲醇溶解，制成含上述对照品102、126、113、106、137、118、762、100、114、122、119 μg/mL的溶液，作为对照品溶液。
　　23措施学考察
　　231精密度实验取同一份供试品溶液，持续进样5次测定，以丹酚酸B为参照峰，分别计算20个特性色谱峰的相对保存时间和相对峰面积sR值，均不不小于3%。阐明仪器精密度良好。
　　232稳定性实验取同一份供试品溶液，分别于1、3、5、7、9、12、24、48 h进样测定，以丹酚酸B峰为参照峰，分别计算20个特性色谱峰的相对保存时间和相对峰面积sR值，均不不小于3%，阐明样品溶液在48 h内稳定。
　　233反复性实验同同样品粉末分别精密称取5份，根据上述样品制备措施制成供试品溶液，进样检测。以丹酚酸B峰为参照峰，分别计算色谱中20个特性色谱峰的相对保存时间和相对峰面积的sR值，均不不小于3%。阐明该措施的反复性良好。
　　24成果和分析
　　241丹参高效液相指纹图谱核心色谱峰的LCMS鉴定以13个产地丹参药材的共有模式作为丹参药材的指纹图谱(图1)。在该指纹图谱中，20个色谱峰被选为特性峰。通过和对照品比较相对保存时间(tR)，紫外光谱(UV)和液相色谱—质谱联用(LCMS)质谱数据(见表2)，结合对照品和文献[712]对照，拟定了19个色谱峰的归属为1号峰丹参素，2号峰原儿茶醛，3号峰咖啡酸，4号峰丹酚酸D，5号峰丹酚酸G，6号峰丹酚酸E，7号峰丹酚酸C，9号峰迷迭香酸，10号峰紫草酸，11号峰丹酚酸B，12号峰丹酚酸A，13号峰异丹参酮IIA，14号峰羟基丹参酮IIA，15号峰丹参新醌A，16号峰丹参酮IIB，17号峰二氢丹参酮I，18号峰隐丹参酮，19号峰丹参酮I，20号峰丹参酮IIA。11号峰(丹酚酸B)既是该指纹图谱中的最强峰，又是有效成分。故以其为参照峰，计算各特性峰的相对保存时间(tR)和相对峰面积(ARP)，成果见表3。表2丹参药材中化学成分质谱数据及鉴定表313批不同样产地药材中20个特性峰的相对峰面积值
　　242丹参药材UPLC指纹图谱分析采用上述已建立的指纹图谱措施，对13批丹参药材进行指纹图谱分析，得不同样产地丹参药材指纹图谱，成果见图2(彩图页第616页)。为了阐明丹参药材之间的差别，引入总差别率pTD(%)的概念。差别率的定义是以每个特性指纹峰和相应的原则特性指纹峰的面积归一化值间的差和原则特性指纹峰面积归一化值的比值来表达两者间的差别限度，总差别率则是将每个特性指纹峰的差别率求和即得。计算公式：
　　pTD=ΣniAs′Ai′As′×n
　　其中，pTD 为总差别率，As′为原则特性峰面积归一化值，Ai′为待比较药材特性峰的面积归一化值，n为特性峰个数。以pTD代表样品图谱和原则图