文档介绍：一种基于酶切作用的胰蛋白酶和糜蛋白酶电化学同时检测方法
一种基于酶切作用的胰蛋白酶和糜蛋白酶电化学同时检测方法
本发明公开了一种基于酶切作用的胰蛋白酶和糜蛋白酶电化学同时检测方法，属于电化学传感【技术领域】。通过金-巯键作用将DNA-多I上的精氨酸羧基位点，糜蛋白酶剪切多肽2上的酪氨酸羧基位点，使得连接于多肽上的相应的纳米信号探针脱离电极表面，导致相应的电子介体硫堇和二茂铁的峰电流下降。随着蛋白酶浓
度的增大，硫堇和二茂铁的峰电流减小，峰电流减小的程度与胰蛋白酶和糜蛋白酶在
- μ g/- μ g/mL范围内呈良好的线性关系， ng/mL,表明本发明建立传感方法可用于对多种蛋白酶的高灵敏和特异性同时检测。
[0009]本发明的技术效果是:本发明利用金-巯键作用将制备的DNA-多肽复合物固定于电极表面，进而通过DNA杂交反应将两种具有明显电位差异的纳米信号探针组装于电极上，在胰蛋白酶和糜蛋白酶对电极表面相对应多肽的选择性剪切作用下，纳米信号探针随之脱离电极表面，使得电子介体硫堇和二茂铁的峰电流下降，其下降程度与相对应的蛋白酶的浓度呈线性，可实现胰蛋白酶和糜蛋白酶的高灵敏度和选择性同时识别检测，具有良好的应用前景。
【专利附图】
【附图说明】
[0010]图1是(A) DNA-多肽复合物和(B)纳米信号探针合成示意图，(C)传感器构建示意图。
[0011]图 2 是(a) Au NPs, (b)DNAl'，(c) DNA2'，(d) DNAl; -Au NPs, (e) DNA2' -AuNPs, (f) Thi, (g) DNAl' -Au NPs-Thi, (h) DNA2' -Au NPs-Fc 和(i) Fe 的紫外可见光谱图。
[0012]图3 是(a) Thi, (b)DNAl' -Au NPs-Thi, (c) Fe 和(d) DNA2' -Au NPs-Fc 的傅里叶变换红外光谱图。
[0013]图4是不同电极的交流阻抗谱图:(a)裸金电极，(b)两种多肽修饰电极，(c) MCH/多肽修饰电极，(d)纳米探针/多肽修饰电极，(e)胰蛋白酶和糜蛋白酶剪切后的电极。内插图为等效电路图；Rs，Zw, Ret和Cdl分别表示溶液的电阻，Warburg扩散电阻，电子转移阻抗和双层电容。
[0014]图5是不同电极的SEM图:(A)多肽修饰金片，(B)两种纳米探针/多肽修饰金片，(C)胰蛋白酶和糜蛋白酶剪切后的金片。
[0015]图6是(A)胰蛋白酶检测的脉冲伏安曲线，从a到j的胰蛋白酶浓度为:0，，, , ，, ，4，6,7 μ g/mL ; (B)胰蛋白酶线性关系，(C)糜蛋白酶检测的脉冲伏安曲线，从a到j的糜蛋白酶浓度为:0，, , , ，，I, 2，5，6 μ g/mL, (D)糜蛋白酶线性关系图。
[0016]图7是交叉反应实验:(A)两种酶都不存在，(B) μ g/mL胰蛋白酶存在，(C) μ g/mL糜蛋白酶存在，(D) μ g/ μ g/mL糜蛋白酶同时存在。