文档介绍：一种基于核酸酶信号放大的检测方法
一种基于核酸酶信号放大的检测方法
本发明涉及免疫检测与核酸技术交叉领域，具体公开了一种基于核酸酶信号放大的超灵敏检测方法；所述方法是将免疫检测转变为核酸检测，利用核酸扩增、连接或剪切技术对信号进行放大。RCA)、连接酶链反应(Ligase Chain Reaction,LCR)等,通过电泳来实现检测。
[0010]具体地，当核酸酶为DNA连接酶时，所述的检测方法包括如下步骤:
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，洗板、甩干后加入DNA连接酶标记抗原或抗体反应形成DNA连接酶复合物，
，向微孔板中加入引物、模板、探针、Mg2+、水，通过DNA连接酶复合物对核酸的连接反应将免疫检测转变为核酸检测，利用核酸放大体系从而高灵敏地检测出待测抗原或抗体。
[0011]基于DNA聚合酶的免疫检测体系:先将纯化的抗体(抗原)包被在酶标板上，用于捕获待测样本中的抗原(抗体)，再用核酸聚合酶标记的抗体(可采用生物素-亲和素系统，或其他类型的交联方式)与抗原或抗体反应形成抗体-抗原-核酸聚合酶标抗体复合物；力口A DNA模板、引物、dNTP mixture、Mg2+、探针和水等核酸扩增反应用试剂,进行核酸扩增,通过实时荧光PCR反应(RT-PCR)来实现检测。
[0012]具体地，当核酸酶为DNA聚合酶时，所述的检测方法包括如下步骤:
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，洗板、甩干后加入DNA聚合酶标记抗原或抗体反应形成DNA连接酶复合物；
，向微孔板中加入引物、模板、探针、Mg2+、dNTPmixture和水，通过DNA聚合酶复合物对核酸的扩增反应将免疫检测转变为核酸检测，利用核酸放大体系从而高灵敏地检测出待测抗原或抗体。
[0013]基于DNA内切酶、外切酶的免疫检测体系:先将纯化的抗体(抗原)包被在酶标板上，用于捕获待测样本中的抗原(抗体)，再用核酸聚合酶标记的抗体(可采用生物素-亲和素系统，或其他类型的交联方式)与抗原或抗体反应形成抗体-抗原-核酸聚合酶标抗体复合物；向体系中加入带有酶切断位点的金纳米-核酸复合物团簇，如体系存在DNA外切酶或内切酶，能够把连接胶体金的DNA链剪切，从而改变金纳米溶液的颜色，通过颜色的变化，来实现检测。
[0014]当核酸酶为DNA内切酶时，所述的检测方法包括如下步骤:
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，洗板、甩干后加入DNA内切酶标记抗原或抗体形成DNA内切酶复合物；
，向微孔板中加入金纳米-核酸复合物，通过DNA内切酶复合物对核酸的剪切反应将免疫检测转变为核酸检测，利用核酸放大体系从而高灵敏地检测出待测抗原或抗体。
[0015]对以上提及的检测模型，如下文图示。但该发明不仅仅局限于此，其发明的核心思想是用核酸酶(DNA核酸酶、RNA核酸酶等)替代传统ELISA体系中所使用的HRP，ALP等，以期能把对蛋白或小分子的免疫检测体