文档介绍：MAX 基因关联蛋白 A(MgA)ELISA 试剂盒说明书本试剂仅供研究使用标本:体液 MAX 基因关联蛋白 A(MgA)ELISA 试剂盒说明书试验原理: BFGF 试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验( ELISA ). 已知 BFGF 浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将 BFGF 和生物素标记的抗体同时温育。人碱性成纤维细胞生长因子 ELISA 检测试剂盒洗涤后,加入亲和素标记过的 HRP 。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物, 然后加入底物 A、B ,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中 BFGF 的浓度呈比例关系。 MAX 基因关联蛋白 A(MgA)ELISA 试剂盒说明书自备材料 1 .蒸馏水。 2 .加样器: 5ul 、 10ul 、 50ul 、 100ul 、 200 、 500ul 、 1000ul 。 3 .振荡器及磁力搅拌器等。安全性 1 .避免直接接触终止液和底物 A、B 。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。 2 .实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。 3 .不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。 MAX 基因关联蛋白 A(MgA)ELISA 试剂盒说明书操作注意事项 1 .试剂应按标签储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。 2 .实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。 3 .不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 4 .使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物 A、B 液时,避免使用带金属部分的加样器。 5 .使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 6 .洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。 7. 底物 A 应挥发, 避免长时间打开盖子。底物 B 对光敏感, 避免长时间暴露于光下。避免用手接触, 有毒。实验完成后应立即读取 OD 值。 8 .加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。 9 .按照中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。 MAX 基因关联蛋白 A(MgA)ELISA 试剂盒说明书样品收集、处理及保存方法 1 、血清----- 操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内***的试管。收集血液后, 1000 ×g离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2 、血浆-----EDTA 、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。 1000 ×g 离心 30 分钟去除颗粒。 3 、细胞上清液---1000 ×g 离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。 4、保存------ 如果样品不立即使用, 应将其分成小部分-70 ℃保存, 避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒, 检测前先离心或过滤。不要在 37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。试剂的准备标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。 2 .洗涤缓冲液( 50× )的稀释:蒸馏水 50 倍稀释。 MAX 基因关联蛋白 A(MgA)ELISA 试剂盒说明书操作步骤 1 .使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。 2 .根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。 3. 加入稀释好后的标准品 50ul 于反应孔、加入待测样品 50ul 于反应孔内。立即加入 50ul 的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀, 37℃温育 1 小时。 4 .甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡 30 秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作 3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。 5 .每孔加入 80ul 的亲和链酶素-HRP ,轻轻振荡混匀, 37℃温育 30 分钟。 6 .甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡 30 秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作 3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。 7 .每孔加入底物 A、B各 50ul ,轻轻振荡混匀, 37℃温育 10 分钟。避免光照。 8 .取出酶标板,迅速加入 50ul 终止液,加入终止液后应立即测定结果。 9 .在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。局限 6 号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到精确的结果。 MAX 基因关联蛋白 A(MgA)ELISA 试剂盒说明书性能 1. 灵敏度:最小的检测浓度小于 1 号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 。 2. 特异性:不与其它细胞因子反应。 3. 重复性:板内、板间变异系数均小于 10% 。 MA