实验四 植物组织中核酸的提取和测定.docx

文档介绍：质。
Dt臥+二苯***试剂型2蓝色物
实验四 植物组织中核酸的提取和测定
一、 实验目的
掌握从植物组织中提取核酸的方法。
掌握RNA、DNA的定性鉴定方法。
二、实验原理
用冰冷的稀三***乙酸或稀高***乙酸溶液在低温下抽提植物质。
Dt臥+二苯***试剂型2蓝色物
实验四 植物组织中核酸的提取和测定
一、 实验目的
掌握从植物组织中提取核酸的方法。
掌握RNA、DNA的定性鉴定方法。
二、实验原理
用冰冷的稀三***乙酸或稀高***乙酸溶液在低温下抽提植物组织匀浆，以除去酸溶性小分子物质，再用有机溶剂 如乙醇、乙瞇等抽提，去掉脂溶性的磷脂等物质。最后用浓盐溶液（10%***化钠溶液）***酸（70^ ）分 别提取DNA和RNA,再进行定性鉴定。
由于核糖和脱氧核糖有特殊的颜色反应，经显色后所呈现的颜色深浅在一定范围内和样品中所含的核糖和脱氧 核糖的量成正比，因此可用此法来定性、定量测定核酸。
核糖的测定
测定核糖的常用方法是苔黑酚（即3， 5－二羟甲苯 法（Orcinol反应））。当含有核糖的RNA与浓盐酸及3, 5-二羟甲苯在沸水浴中加热10〜20分钟后，有绿色物 产生，这是因为RNA脱嘌吟后的核糖与酸作用后生成糠 醛，后者再与3， 5－二羟甲苯作用产生绿色物质。
氧核糖的测定
测定脱氧核糖的常用方法是二苯***法。含有脱氧核 糖的DNA和二苯***在沸水浴中共沸10分钟后，产生蓝 色。这是因为DNA嘌吟核苷酸上的脱氧核糖与酸生成3 －羟基－6－***基戊醛，它再和二苯***作用产生蓝色物
此法易受多种糖类及其衍生物和蛋白质的干扰。
上述两种定糖的方法准确性较差，但快速、简便，能鉴别DNA与RNA，是鉴定核酸、核苷酸的常用方法。
三、仪器、原料与试剂
仪器：恒温水浴锅、离心机、吸管、量筒、电炉、布氏 漏斗装置、 烧杯、剪刀。
原料：新鲜菜花（花椰菜）
试剂：
95% 乙醇：600mL
***： 400mL
5%高***酸溶液： 200 mL
高***酸溶液： 200mL
10%***化钠溶液： 400mL
标准RNA 溶液（5mg/100mL）： 50mL
标准DNA 溶液（15mg/100mL）： 50mL
粗***化钠： 250g
海砂： 5g
二苯***试剂60mL
将1g二苯***溶于100 mL冰醋酸中， mL浓 硫酸（置冰箱中可保存6个月。使用前，在室温下摇匀）。
三***化铁浓盐酸溶液： 25mL
将2 mL10%三***化铁溶液（用FeCl3 〃 6H2O配制）加入到
400 mL 浓盐酸中。
苔黑酚乙醇溶液： 200mL
溶解6g苔黑酚于100 mL95%乙醇中（可在冰箱中保存1 个月）
四、操作步骤
(一)核酸的分离
取菜花的花冠20g，剪碎后置于研钵中，加入20mL95%乙醇和400mg海砂，研磨成匀浆。 然后用布氏漏斗抽滤，弃去滤液。
滤渣中加入20mL***，搅拌均匀，抽滤，弃去滤液。
再向滤渣中加入20mL***，搅拌5分钟后抽干(用力压滤渣，尽量除去***)。
在冰盐浴中，将滤渣悬浮在预冷的20mL5%高***酸溶液中。搅拌，抽滤，弃去滤液。
将滤渣悬浮于20mL***，搅拌5分钟后抽干(用力压滤渣，尽量除去***)。
滤渣中加入20mL***，搅拌5