文档介绍：五年制本科医学检验专业分子生物学检验技术教学大纲
《分子生物学检验技术》课程教学大纲
课程编号：
课程名称：分子生物学检验技术
英文名称：analysis technique of molecular biology
课程NA的分离和纯化。
思考题：
1、酚-***仿法抽提基因组DNA的原理。
2、质粒制备的主要方法是什么？并阐明其基本原理。
3、如何鉴定核酸的浓度和纯度。
第七章 DNA重组技术
第一节 工具酶
【掌握】基因重组的主要工具酶和它们的作用。
第二节 DNA重组载体
【掌握】DNA重组的主要载体和它们各自的优点。
第三节 DNA重组与鉴定
【熟悉】克隆和DNA重组的概念，基因重组的基本步骤，载体的概念及特征，载体的筛选标志和筛选方法，转化、转染、转导的概念、感受态菌的概念。
【了解】基因重组的发展历史，重组DNA技术意义。
第四节 外源基因的蛋白表达
【掌握】启动子、增强子、终止子、p因子的概念和作用;融合蛋白的概念以及表达融合蛋白的优点，真核细胞表达元件，哺乳动物基因转移的遗传选择性标记。
【了解】原核和真核生物表达的区别;表达产物的分离与纯化。
第五节DNA序列测定
【了解】双脱氧末端终止法测序的原理。
思考题：
一、名词解释：非融合型表达蛋白、融合表达蛋白、包涵体载体、基因克隆、转化、转染、转导、感受态
二、问答题：
1、基因重组中主要的工具酶有哪些？它们的基本作用是什么？
2、什么是限制性内切酶？有几种限制性内切酶？基因工程中常使用的是哪一种？为什么？
3、真核表达体系和原核表达体系的主要区别。
第八章 聚合酶链式反应及其在基因诊断中的应用
第一节 聚合酶链式反应
【掌握】PCR反应的概念和原理，PCR反应体系的组成成分。
第二节 以PCR为基础的相关技术
【掌握】逆转录PCR原理和方法。
第三节 PCR 产物的检测
【掌握】限制性片段长度多态性，单链构象多态性。
第四节 PCR 技术在分子诊断中的应用
【了解】PCR技术在临床医学中的应用。
思考题：
一、名词解释：PCR、RT-PCR
二、问答题：
1、PCR的基本原理是什么？PCR反应体系中基本的反应成分有哪些？
2、PCR产物的检测方法有哪些？
第九章 核酸分子杂交技术与应用
【掌握】杂交的基本原理，融解温度，分子杂交的分类和应用，Southern印迹杂交的基本过程。
【熟悉】分子杂交过程，影响探针杂交的因素，探针标记的方法，杂交信号检测的方法。
思考题：
1、名词解释：分子杂交、探针、原位杂交、融解温度、Southern杂交
2、问答题：分子杂交的探针的种类和特点。
第十章 蛋白质分析技术
【自学】本章内容
第十一章 生物芯片技术与应用
【了解】生物芯片技术的应用。
思考题：
1、名词解释：生物芯片
2、问答题：简述生物芯片的医学应用价值
第十二章 细胞凋亡和检测技术
【掌握】细胞周期、细胞增殖和细胞凋亡的基本概念及其与医学研究、医学检验的关系。
思考题：
一、名词解释：细胞周期、细胞周期控制点、细胞凋亡、细胞坏死
二、问答题：
1. 细胞坏死和凋亡的区别是什么?
2. 如何检测细胞凋亡的情况。
四、实验
【实验名称】真核细胞DNA的分离提取及酶切电泳
【实验目的】
1、以人外周血为原料，进行基因组DNA的提取，从而掌握真核细胞DNA的原理、原则、提取方法，进而掌握外源基因的基本制备方法。
2、明确提取中各试剂的作用及各环节的注意事项。
3、掌握琼脂糖凝胶电泳分离鉴定DNA的原理和技术。
【实验原理】真核细胞DNA分子是以核蛋白形式存在于细胞核中，制备DNA既要将其与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA的完整性，因此，从全血中制备基因组DNA时，首先用去污剂Triton X-100 直接破裂红细胞和白细胞膜，使之释放出血红蛋白及细胞核，通过离心分离即可获得白细胞核；
用SDS破坏核膜；用EDTA抑制Dnase的活性；用酚/***仿抽提除去蛋白质，再用***仿除去DNA溶液残存的蛋白质；最后用无水乙醇沉淀，即可获得基因组DNA。
【实验材料】
1、器材：恒温水浴箱，台式冷冻高速离心机，紫外分光光度计，电泳仪，电泳槽，离心管， Eppendorf管，剪刀，牙签，宽口移液管(5ml、10ml)，移液器，吸头，锥形瓶，简易凝胶紫外观察仪或凝胶成像系统等。
2、试剂：磷酸盐缓冲液(PBS)、 DNA提取缓冲液、苯酚、TE缓冲液()、5×TBE电泳缓冲液、蛋白酶K(20mg／m1)，溴化乙锭(ethidium bromide，EB)溶液，***仿，异戊醇