文档介绍：高分子量小麦谷蛋白亚基
第一页，共20页。
● 实验内容：
测定小麦高分子量谷蛋白亚基
●实验目的:
①掌握利用不连续十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离小麦高分子量谷蛋白亚基（HMW-GS）制胶：按表1的配方分别配制 8% 和 15% 两种分离
胶，然后用两个取液器进行以下操作，
混匀的 15% 分离胶，加到玻璃板之间，再向 15% 分离
胶中加入 8% ，充分混匀后，从中吸取
，如此反复操作上述步骤，
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直至距玻璃板上缘约 3cm 处时，向胶面上加一层正丁醇，静置，直至分离胶凝固。倒置胶板，流出正丁醇，用蒸馏水冲洗胶面，用滤纸吸尽多余水。
按表1配制5%浓缩胶，混匀后倒入玻璃板之间，将梳子放置在玻璃板间，注意不要产生气泡，静置至胶凝。待浓缩胶凝固后，垂直取出梳子，加蒸馏水，甩出样品槽中的残胶。
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成分
8%分离胶50ml
15%分离胶50ml
5%浓缩胶10ml
H2O

30%Acr

1M Tris-HCl ()

------
1M Tris-HCl ()
------
------

10%SDS

10%AP
()
()

TEMED
()

表1 分离胶与浓缩胶配方
成分
8%分离胶50ml
15%分离胶50ml
5%浓缩胶10ml
H2O

30%Acr

1M Tris-HCl ()

------
1M Tris-HCl ()
------
------

10%SDS

10%AP
()
()

TEMED
()

表1 分离胶与浓缩胶配方
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④ 点样：将胶板放在电泳槽中加入电极缓冲液至高出内侧，用微量进样器吸取蛋白质10-20ul分别加在每个样品槽底部凝胶面上。
⑤ 电泳：下槽为正极，上槽为负极，每胶板30mA稳流电泳，直至溴酚蓝接近分离胶底部，电泳完毕。
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⑥ 卸胶、染色和脱色：卸下胶板，用手术剪撬开玻璃板，%考马斯亮蓝溶液中，放在摇床上缓缓摇动染色过夜；次日，取出凝胶，蒸馏水漂洗直至呈现清晰可见的蛋白质色带。
⑦ 拍照：利用凝胶成像仪或者普通像机拍照观察。
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图1小麦高分子量谷蛋白亚基的命名是依其相对迁移率，
● 结果分析
1 小麦高分子量谷蛋白亚基的命名
小麦高分子量谷蛋白亚基的命名是依其相对迁移率，
按Payne的数字命名法命名，见图1
图1小麦高分子量谷蛋白亚基的命名是依其相对迁移率，
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2 小麦高分子量谷蛋白亚基 SDS-PAGE 图谱
部分小麦高分子量谷蛋白亚基 SDS-PAGE 图谱见图 2
图 2 部分小麦高分子量谷蛋白亚基 SDS-PAGE 图谱
2 小麦高分子量谷蛋白亚基 SDS-PAGE 图谱
部分小麦高分子量谷蛋白亚基 SDS-PAGE 图谱见图 2
2 小麦高分子量谷蛋白亚基 SDS-PAGE 图谱
部分小麦高分子量谷蛋白亚基 SDS-PAGE 图谱见图 2
图 2 部分小麦高分子量谷蛋白亚基 SDS-PAGE 图谱
2 小麦高分子量谷蛋白亚基 SDS-PAGE 图谱
部分小麦高分子量谷蛋白亚基 SDS-PAGE 图谱见图 2
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图3 中国春、红火麦、马奎斯和济麦20 高分子量谷蛋白亚基 SDS-PAGE 图谱
HMW-GS的变异由Glu-A1、Glu-B1和Glu-D1三个位点上的等位基因所控制，不同小麦基因型的高分子量谷蛋白亚基组成不同，但也有相同。如中国春、红火麦、马奎斯和济麦20的高分子量谷蛋白亚基SDS-PAGE图谱见图 3
图3 中国春、红火麦、马奎斯和济麦20 高分子量谷蛋白亚基 SDS-PA