生物物理化学实验报告——ITC.pdf

文档介绍：结构化学实验报告
等温滴定量热法测定两种蛋白质间相互作用
2012/5/5
实验目的：
了解 MicroC N，突跃中
点处曲线的斜率就是两种蛋白相互作用的结合常数 K 。
D
决定曲线形状的主要参数是 C 值：
C = 滴定池中的蛋白浓度/ K = [M]tot/ KD × N
D
C 值越大，曲线越陡；C 值越小，曲线越平缓，没有明显的突跃。一般 C 值在 10-100 之间实
验效果最好。
2实验材料：
蛋白质 tse1（17KD）
蛋白质 tsi1（16KD）
实验步骤：
1. 使用紫外分光光度计在 280nm 检测波长下测定蛋白质溶液中蛋白质的浓度，根据所需要
的蛋白质浓度比稀释蛋白质溶液。
2. 在量热仪的注射器和样品池中分别加入两种不同的蛋白质样品。
⑴注射器加样
①将装有约 100 微升样品的 PCR 管放入样品试管槽。
②注射器移到“Rest Position”；然后左手转动注射器上端，使注射器的连接孔对准支架
上的孔。右手将白色细管顶部的连接头水平对准注射器连接孔，先轻轻将乳白色连接头
旋入连接孔，随后将乳白色连接头后的金属连接头轻轻拧紧即可。
③在“Instrument Control”界面中点击“Syringe Fill”，检查连接是否正常，点击 OK；
④将注射器移到“Loading Position”，针头插入到试管中，点击 OK；
⑤仪器开始自动吸取样品，检查是否加满。将白色细管轻轻旋下，放回原位。
3⑥如果样品池已经加入样品，将注射器完全置入样品池中，便可开始滴定。

⑵样品池加样
①确认样品池、玻璃注射器均已清洗；
②用玻璃注射器吸取 300μl 样品，轻弹