文档介绍：龙胆泻肝丸微生物限度检查方法验证
2010版中国药典
目的:建立一种龙胆泻肝丸微生物限度检查方法。方法:采用药典规定的常规法和稀释法,通过验证确认所采用的方法是否适合于*该药品的细菌、霉菌和酵母菌、控制菌的检查。
结果:细菌、霉菌和酵母菌方法验证中回收率在70%以上;控制菌方法验证中阳性对照菌检出,阴性对照菌未检出。
结论:龙胆泻肝丸微生物限度检查法的细菌、霉菌和酵母菌数可以采用常规法或稀释法进行检查,控制菌检查可以采用常规法检查。
培养基
营养琼脂培养基、
玫瑰红钠琼脂培养基、
胆盐乳糖培养基、
胆盐乳糖发酵培养基、
营养肉汤培养基、
改良马丁液体培养基、
改良马丁琼脂培养基、
MUG培养基、
靛基质试液。
菌种
大肠埃希菌[(B)44102]、
金黄色葡萄球菌[(B)26003]、
枯草芽孢杆菌[(B)63501]、
白色念珠菌[(F)98001]、
黑曲霉[(F)98003]
供试品: 龙胆泻肝丸。
备料单
器皿
数量
平皿
20个
试管
4支
吸管
10ml 3支
吸管
1ml 9支
量筒
100ml
菌液的制备
大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌菌液制备
取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的营养琼脂斜面培养物接种于10ml营养肉汤培养基中,35~37℃培养18~24小时;
%无菌***化钠溶液9ml,采用10倍递增稀释法,稀释至10-6或10-7,制成每1ml含菌数50~100cfu的菌悬液。
白色念珠菌菌液制备
取白色念珠菌的改良马丁琼脂斜面培养物接种于10ml改良马丁培养基中,23~28℃培养24~48小时;
%无菌***化钠溶液9ml,采用10倍递增稀释法,稀释至10-6或10-7,制成每1ml含菌数50~100cfu的菌悬液。
黑曲霉菌液制备
取黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中,23~28℃培养5~7天,加入3~%无菌***化钠溶液,将孢子洗脱,吸至无菌试管中,
%无菌***化钠溶液9ml,采用10倍递增稀释法,稀释至10-4~10-6,制成每1ml含孢子数50~100cfu的孢子悬液。
供试液的制备
取供试品10g,***化钠蛋白胨缓冲液至100ml,用匀浆仪混匀,作为1:10供试液。稀释3个梯度。
回收率测定
细菌回收率测定
 试验组
稀释法:取1:10供试液1ml等量分注入于5个平皿中,每个平皿加试验菌(10-6约50~100cfu)1ml,立即倾注营养琼脂培养基,待凝固后,置30~35℃培养48小时,逐日观察结果。