文档介绍：: .
镊子放入少量 棉花 ,再用牛皮纸包上 (现在多不用移液管而用取样
器 );取样器的“枪头”放在 可灭菌的专用塑料盒 中,也可放在 上口用牛皮纸包好的烧杯
中⋯⋯在 121℃ ( 1kg/cm2 压力 )下灭菌 15min。值得注意的
是,实验中所需的棉花不能用 脱脂棉 ,因脱脂棉易吸水 ,吸水后容易引起污染 。灭
菌后 ,通常将实验用具放入 60~80℃的 烘箱中烘干 ,以除去灭菌时的水分 。在进行实验操作前 ,将需要使用的用具从烘箱中取出 ,放到超净台上 (没有超净台时 ,
可制作一个双手在内操作、又可在外观看、并有紫外灯灭菌的箱子 ),然后打开紫外
灯和过滤风 ,灭菌 30min。
除了实验用具必须无菌外 ,各种培养基也必须是无菌的。培养基是微生物 生存
的环境 和营养物质 。“ 细菌喜荤 ,霉菌喜素 ”,通常细菌培养基要用 蛋白胨和酵母
提取物 来配制 ,还要加入 一定量的***化钠 ,以维持一定的渗透压 ;霉菌培养基一般
用无机物配制或添加蔗糖的豆芽汁 即可。此外 ,细菌通常要求在 中性偏碱 的环境中
生长 ,霉菌要求在 中性偏酸 的环境中生长 ,因此 ,在制备培养基时需 调节培养基的
酸碱度 。加入培养基的 三角瓶、试管也要在 121℃ 下灭菌 15min,如果培养基中有
葡萄糖 ,为防止葡萄糖分解碳化 ,要用 500g/cm2 压力 ( 90℃以上 )灭菌 30min 。有
些不能加热灭菌的化合物 ,如尿素 (加热会分解等 ,只能用 G6 玻璃砂漏斗过滤 ,但玻
璃砂漏斗使用前也要在 121℃下用纸包好灭菌。玻璃砂漏斗有 6种 ,即 G1~G6,G6 孔
径最小 ,细菌不能滤过 。玻璃砂漏斗用后需用 1molL 的 HCL 浸泡 ,并抽滤去酸 再用
蒸馏水洗至洗出液呈中性 ,干燥后保存。
在将培养基加到三角瓶、试管和培养皿中时 ,三角瓶口、试管口、培养
皿壁上不能沾有培养基 ,否则容易发生污染。因此 ,在将培养基转移到三角瓶和
试管中时必须用三角漏斗 ;向培养皿中转移已灭菌的培养基时 ,也不要沾在壁上。
用棉花制作三角瓶和试管的塞子时 ,通常将棉花摊成一圆片 ,再裹到一适
当直径的木头 (或筷子 )上。放入三角瓶或试管口中后 ,周围没有皱褶和缝隙容易
拔出 ,但用手提着棉塞时 ,三角瓶或试管又不能落下。塞子制作的好坏是控制
污染发生的关键。如果有条件 ,可以用封口膜代替棉塞。干热灭菌 :160 ℃~170 ℃。
尽管培养基的配方各不相同 ,但其基本成分都一样 (五类 )。
人及动物的营养物质 :水、无机盐、糖类、脂质、蛋白质、 维生素六类植
物的营养物质：矿质元素、水、二氧化碳等 三类；
微生物的营养物质： 水、无机盐、碳源、氮源及生长因子 等五类。
（1）获得纯净培养物的关键是 防止外来杂菌的入侵。
要注意以下几个方面 :
①对实验操作的空间、操作者的衣着和手 ,进行清洁和消毒。②将用于微生物
培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌③为避免周围环境中微生物
的污染 ,实验操作应在 酒精灯火焰 附近进行。④实验操作时应避免已经灭菌
处理的材料用具与周围的物品相接触。