文档介绍：响应曲面法优化防己中汉防己甲素及汉防己乙素的提取工艺
【摘 要】 目的:以汉防己甲素和汉防己乙素的提取率作为考察指标,优化防己中汉防己甲素和汉防己乙素的提取工艺。方法:利用高效液相色谱法测定汉防己甲素和汉防己乙素的含量,采用响上海源叶生物);乙***、甲醇、二乙***为色谱纯;乙醇为分析纯;水为超纯水。
2 方法与结果
汉防己甲素和汉防己乙素测定方法
HPLC色谱条件 色谱柱C18柱(×250mm,5μm);流动相:乙***-甲醇-%二乙***(30∶ 35∶ 35);检测波长:282nm;柱温:25℃;理论塔板数:按汉防己甲素峰计算不低于5000;流速:;进样量:10μL。如图1所示。
溶液配制 ①对照贮备液:、汉防己乙素,用甲醇溶解,定容至25mL量瓶中,摇匀,即得500μg/mL的混合对照品溶液。②供试品溶液:,加适量超声提取得溶液到供试品。按“”项下色谱条件进样测定,记录色谱图,如图1所示。 标准曲线绘制 、、、2、、3. 2mL,稀释到10mL,摇匀,得到40、60、80、100、120、160μg/mL混合对照品溶液。以甲醇作为空白溶液,注入色谱仪,以峰面积为纵坐标,以对照品溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线,得汉防己甲素回归方程Y=-100992,相关系数r2=;汉防己乙素回归方程Y=7137X-38969,相关系数r2=。 单因素提取试验
乙醇体积分数 ,在料液比1∶ 40g/mL,超声时间40min,分别以60%、70%、80%、95%、100%乙醇提取,结果如图2所示。汉防己甲素、汉防己乙素均在70%提取率最高。 料液比 ,在乙醇浓度95%,超声时间40min的条件下,分别以料液比(g∶ mL)1∶ 20、1∶ 30、1∶ 40、1∶ 50、1∶ 60进行提取,结果如图3所示。汉防己甲素在料液比1∶ 40时,提取率最高,汉防己乙素在1∶ 50时提取率最高。 超声时间的影响 ,在乙醇浓度95%,在料液比1∶ 40g/mL,分别提取20、30、40、50、60min,结果如图4所示。在20~50min汉防己甲素及汉防己乙素的提取率均呈上升趋势,超过50min提取率下降,因此超声时间在50min较合适。 响应曲面实验设计 根据单因素试验结果和响应面中心组合试验设计原理,选取3个因素为响应因素,浸膏中汉防己甲素、汉防己乙素提取率为响应值,运用Design-Expert 10软件设计三因素三水平响应面试验,结果见表1。
响应面优化试验结果 试验方案及结果见表2。
拟合试验数据,建立二次多元回归方程:R(汉防己甲素)=-+++------;R (汉防己乙素)=--+