文档介绍：实验五 血红蛋白含量的测定、血型鉴定
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实验目的
掌握血红蛋白的测定方法；
学****鉴定血型的基本方法，观察红细胞凝集现象，掌握ABO血型鉴定的原理。
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测定血红蛋白的意义
人血红蛋白参考值 成年男实验原理
抗原抗体反应——在ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。A抗原加抗A抗体或B抗原加抗B抗体，则产生凝集现象→从而测知受试者红细胞膜上有无A或/和B抗原→判断血型
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IgM抗体凝集红细胞示意图
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IgM抗体凝集红细胞示意图
IgGM在盐水介质中产生凝集
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实验材料
血红蛋白计、；
载玻片、刺血针、牙签、一次性采血管、A型和B型标准血清、生理盐水、酒精棉球等。
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方法与步骤-血红蛋白测定
。
取20μl被检血液, 迅速将吸血管插入测定管底部盐酸液中，缓慢挤出血液，再吸取上部清液，反复冲洗吸血管2~3次，并混匀，静置10min。
沿着管壁加入蒸馏水，逐步稀释至与标准色柱色调一致后，读取重量（或百分）刻度值报告结果。
标准制换算：血红蛋白(g/L)=血红蛋白(g/dl)×10
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方法与步骤-血红蛋白测定
血红蛋白计包括
①标准比色架，架的两侧镶有两个棕色标准玻璃色柱。
②血红蛋白稀释管，有方形也有圆形的。两侧有刻度，一侧以g为计数单位，对侧以百分率计，按我国情况，%。③20mm3血红蛋白吸管，还有玻璃棒、滴管。
，到刻度10处。
用刺血针刺破指尖采血，血滴宜大些。用血红蛋白吸管的尖端接触血滴，吸血至刻度20ul处（）。
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方法与步骤-血红蛋白测定
用滤纸片或棉球擦净吸管口周围的血液，将吸管插入血红蛋白稀释管的盐酸内，轻轻吹出血液至管底部，反复吸入并吹出稀释管内上层的盐酸，洗涤吸管多次，使吸管内的血液完全洗入稀释管内。摇匀或用小玻璃棒搅匀后，放置10min，使盐酸与血红蛋白充分作用。
把稀释管插入标准比色架两色柱中央的空格中，使无刻度的两侧面位于空格的前后方，便于透光和比色。
用滴管向稀释管内逐滴加入蒸馏水（每加一滴要搅拌），边滴边观察颜色，直至颜色与标准玻璃色柱相同为止。稀释管上液面的刻度读数即为每100ml血液血红蛋白的克数。
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从指尖或耳垂取血一滴，加入含1ml生理盐水的小试管内，混匀，即得约5％红细胞悬液。采血时应注意先用75％酒精消毒指尖或耳垂。)(取少量受检者红细胞（~ ml）用生理盐水洗涤3次，然后加入适量生理盐水调配成5%浓度。
方法与步骤-血型鉴定
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方法与步骤-血型鉴定
（1） 取双凹玻片一块，用干净纱布轻拭使之洁净，在玻片两端用记号笔标明A及B，并分别各滴入A及B标准血清一滴。
（2） 用滴管吸取红细胞悬液，分别各滴一滴于玻片两端的血清上，注意勿使滴管与血清相接触。
（3） 竹签两头分别混合，搅匀。用两根 分别用来混合A型和B型标准
（4）观察结果。如有凝集反应可见到呈红色点状或小片状凝集块浮起。先用肉眼看有无凝集现象，肉眼不易分辨时，则在低倍显微镜下观察，如有凝集反应，可见红细胞聚集成团。
（5） 判断血型 根据被试者红细胞是否被A，B型标准血清所凝集，判断其血型。
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血型判定
正定型
反定型
结果
抗A 抗B
A型RBC B型RBC O型RBC
- -
+ + -
O
+ -
- + -
A
- +
+ - -
B
+ +
- - -
AB
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注意事项
吹血液入稀释管及洗净吸管时，不宜用力过猛。
蒸馏水需逐滴加入，多做几次比色，以免稀释过量。每次比色时，应将搅拌用的玻璃棒取出，以免影响比色。
由于操作过程过长而造成吸管内血液凝固，堵塞管孔时，则要按下列溶液的顺序重复冲洗吸管，即用水→95%酒精→***或***。
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五 注意事项
玻片、试管都要标记！！！， A及B标准血清绝对不能相混,不要依靠用染料颜色标记血清。工作中要形成自己的****惯！
所用