文档介绍：蚕豆病实验设计
2008年安全评价人员教育培训
临床表现
早期有恶寒、微热、头昏、倦怠无力、食欲缺乏、腹痛，继之出现黄疸、贫血、血红蛋白尿，尿呈酱油色，此后体温升高，倦怠乏力加重，可持续3日左右。与溶血性贫血出现的同时，，混匀。，加入4mL预冷的生理盐水，轻轻摇匀，2500r/min离心5min,倾去上清，重复三次。
2、溶血液的制备 ，震荡1min，4℃放置10min以上。
3、NADPH的测定 取石英比色杯两只，标为“测定”及“空白”，按下表操作：
试剂
体积
蒸馏水（uL）
Tris-HCl MgCl2缓冲溶液（uL）
6mmol/L G6P-Na2 (uL)
2mmol/L NADP+ (uL)
2040
300
300
300
混匀后放入带恒温水循环（25℃）的紫外分光 光度计中，预热10min
然后在“测定”中加入溶血液60uL,“空白”中加入溶血剂60uL，混匀
以“空白”调“0”,1min后开始测340nm吸光度（A340），每2min纪录吸光度一次，至10min止，比较每2minA值的变化情况，若相近则表明酶促反应平稳。以10minA值的变化（△A340）计算NADPH的产量。
取试管一支，按下表操作：
试剂
体积
Drabkin(mL)
溶血液(mL)
混匀，室温放置15min，以Drabkin试剂调零，读取540nm的吸光度（A540）。
注意事项
，避免溶血。
。
结果分析
NADPH在340nm处，其每微摩尔的吸光系数（ε），故10min内NADPH的产量计算公式为：
NADPH产量（μmol） =
血红蛋白氧化为高铁血红蛋白以后，在540nm处，其毫摩尔吸光细数（ε）为44，故溶血液中血红蛋白的含量计算公式为：
血红蛋白含量（mmol）=
（U/g Hb）的计算
G6PD比活性单位（U/g Hb）
=
=
【参考范围】正常值：
从生化代谢解释患儿的临床表现和实验室检查结果
生化角度
实验室检查
检查项目
检查值
正常值
红细胞
×1012/L
—×1012/L
血红蛋白
53g/L
120—160g/L
血清总胆红素
µmol/L
—µmol/L
结合胆红素
µmol/L
总量的20%
未结合胆红素
µmol/L
总量的80%
结果导致
红细胞膜的破坏
胆色素代谢异常
G6PD
磷酸戊糖途径
NADPH
磷酸戊糖
维持谷胱甘肽的还原性
核酸生物合成原料
红细胞膜的破坏
谷胱甘肽阻止氧化血红蛋白，从而保护红细胞膜的完整性，如若缺乏，此时的红细胞易于破裂 。
NADPH—高铁血红蛋白还原酶
GSH
MHb
Hb
红细胞膜的破坏
胆红素
铁卟啉类化合物的降解产物
80%以上来自衰老红细胞破坏所释放的血红蛋白的分解
自由通过生物膜产生毒性作用
G6PD缺乏
NADPH严重缺乏
谷胱甘肽难以保持还原状态
NADPH—高铁血红蛋白还原酶活性低
红细胞膜完整性破坏
红细胞裂解
血红蛋白大量溢出
胆红素生成量增加
Hb大量氧化成MHb，Hb含量减少
具体分析
皮肤及粘膜黄染
血清总胆红素超过17μmol/L即为高胆红素血，一般若在17～34μmol/L，临床无明显黄疸，为隐性黄疸，超过34μmol/L则可见皮肤、粘膜黄染。
血尿
急性溶血时大量红细胞被破坏，其成分从尿液中排除故出现血尿。
具体分析
体温升高
大量溶血，即血红细胞大量破坏，大量的无菌性坏死物质入血，机体动员白细胞吞噬吸收坏死物质，导致无菌性炎症，可引起发热，亦称为吸收热。
呼吸加快及心律升高
由于急性溶血导致循环血量减少，红细胞减少， 血红蛋白减少，氧气供应相对不足，故机体通过加快呼吸频率，以及加快心率维持心输出量的相对稳定以维持机体代谢的供氧。
患者体型瘦小与该病症是否有关，为什么？（选答）
患者体型瘦小与该病症有关
蚕豆病是因为体内缺乏G6PD， G6PD主要影响体内的磷酸戊糖途径 该途径主要生成两种重要的物质即5-磷酸核糖和NADPH
5-磷酸核糖影响：
1：核酸的合成
2：体内己糖和