文档介绍：基于星点设计法优化马齿苋多糖的提取工艺
摘要:旨在用星点设计-响应面法优化马齿苋多糖的提取工艺。采用超声辅助提取法提取马齿苋多糖,以多糖提取率为评价指标,通过提物温度、提取时间、料液比、提取次数等单因素结合星点设计法-响应面试
1 材料与方法
试验材料
具有根、茎、叶的新鲜马齿苋全株采摘于花期前,采摘地点为吉林省吉林地区,经吉林农业科技学院鉴定确认。
试验试剂
D-葡萄糖(分析纯),天津市恒兴化学试剂制造有限公司;苯酚(分析纯),天津基准化学试剂有限公司;石油醚、***、***(分析纯),天津市致远化学制剂有限公司。
仪器与设备
KQ-50DA型数控超声波提取机,昆山市超声仪器有限公司;725N紫外-可见分光光度计,上海精科仪器有限公司;R1001-VN旋转蒸发仪,郑州长城科工贸有限公司;AUY220电子分析天平,日本岛津公司。
试验方法
马齿苋多糖的超声提取及含量检测[8] (1)标准曲线的制备。采用苯酚-硫酸法,精确称取1 g于105 ℃干燥至恒质量的葡萄糖标准品,以蒸馏水为溶剂,溶解定容于100 mL容量瓶中,摇匀后从中量取1 mL溶液,定容于100 mL容量瓶中并摇匀,即得 mg/mL 葡萄糖标准溶液。、、、、 mL置于5个10 mL容量瓶中, mL 6%苯酚試剂摇匀,之后迅速加入5 mL浓硫酸溶液,将试管放入沸水中显色15 min,冷却至室温定容。以水为空白,用紫外-可见分光光度计于490 nm波长处测吸光度,得到葡萄糖标准曲线回归方程。
(2)马齿苋的前期处理。将新鲜马齿苋全株用自来水冲洗以去除表面杂质,将冲洗后的马齿苋在阴凉干燥处晾至无水分,放入55 ℃干燥箱中烘干。将干燥后的马齿苋用粉碎机粉碎,过40目筛后于密封袋中保存。称取适量马齿苋干品置于索氏提取器中,用5倍石油醚连续回流脱脂2次,再用5倍95%乙醇回流提取2次,以除去马齿苋干品中的单糖、低聚糖、苷类等杂质,将滤渣于通风处晾干。经上述处理后,将所得马齿苋粉末于65 ℃恒温干燥箱中干燥至恒质量,用于多糖的提取。
(3)马齿苋多糖的超声提取。称取一定量经上述方法处理的马齿苋粉末,放置在100 mL圆底烧瓶中,以水作为提取溶剂,按照不同提取温度、提取时间、超声功率、料液比进行提取,将所得提取液趁热抽滤,减压浓缩,离心去除杂质,加入无水乙醇沉淀,静置24 h后过滤,用95%乙醇、无水乙醇、***洗涤数次,在60 ℃干燥箱中干燥至恒质量,即得马齿苋多糖粗品。
(4)样品液中多糖含量的测定。称取上述试验制得的马齿苋多糖粗品1 g,用蒸馏水溶解。按照步骤(1)的方法,采用苯酚-硫酸法测定马齿苋粗多糖中的多糖含量。测定样品吸光度,根据葡萄糖标准曲线与回归方程,计算样品中的葡萄糖含量,马齿苋多糖提取率的计算公式如下:
马齿苋多糖提取率=样品中的多糖含量×粗多糖质量/原材料质量×100%。
单因素的考察 (1)提取温度对马齿苋多糖提取率的影响。分别准确称取5份经“”节步骤(2)的方法处理后的马齿苋干品2 g,置于 100 mL 圆底烧瓶中,按照1 g