文档介绍：荧光定量 PCR 基因表达检测试剂盒
说明书(通用版)
前言
随着荧光定量PCR技术的成熟和荧光定量PCR仪的普及，-H2O up to 20ul
Total 20ul
2. 反转录反应条件如下：
25℃ 10 分钟
40℃ 30 分钟
95℃ 2 分钟
Real Time PCR反应
1． 目的基因荧光定量 PCR 反应体系的配制（反应液请在冰上配制）：
T-fluo-PCR buffer 26
T-probe 1ul
qTaq polymerase 2ul
cDNA 1ul
Total 30ul
2. 管家基因荧光定量 PCR 反应体系的配制（反应液请在冰上配制）：
I-fluo-PCR buffer 26
I-probe 1ul
qTaq polymerase 2ul
cDNA 1ul
2Total 30ul
（反应液请在冰上配制）：
随机取一管cDNA，然后用双蒸水按 100、101、102、103梯度稀释(10倍梯度稀释),然后各
取1 µl进行Real Time PCR反应,对应的管家拷贝数分别为：107/ml、106/ml、105/ml、104/ml。
I-fluo-PCR buffer 26
I-probe 1ul
qTaq polymerase 2ul
cDNA 1ul (分别用上述 4 个稀释度的 cDNA)
Total 30ul
4. Real Time PCR反应，PCR反应条件
Roche lightcycler 荧光仪的程序设置
94℃ 3 分钟 1 cycler
94℃ 5 秒
60℃ 20 秒
ABI 系列 5700、7700、icycler、MJ、Rotogene、FTC2000、Slan 等荧光仪的程序设置
94℃ 4 分钟 1 cycler
94℃ 20 秒
60℃ 30 秒
实验结果分析
实验数据分析可以采用 2 种方法：
1．2-ΔΔCt 表示的是实验组目的基因的表达相对于对照组的变化倍数，使用这