文档介绍:薄层色谱法
薄层色谱法系将供试品溶液点于薄层板上,在展开容器内用展开剂展开,使供试品所含成分分离,所得色谱图与适宜的对照物按同法所得的色谱图对比并可用薄层扫描仪进行扫描,用于鉴别、检查或含量测定。
仪器与材料
(1)薄层板按支持物的材平台上于室温下晾干后,在110C烘30分钟,即置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度,在反射光及透视光下检视,表面应均匀、平整、光滑,无麻点、无气泡、无破损及污染。
(2)点样除另有规定外,在洁净干燥的环境,用专用毛细管或配合相应的半自动、自动点样器械点样于薄层板上,一般为圆点状或窄细的条带状,点样基线距底边10~15mm,高效板一般基线离底边8〜10mm。圆点状直径一般不大于4mm,高效板一般不大于2mm;接触点样时注意勿损伤薄层表面。条带状宽度一般为5~10mm。高效板条带宽度一般为4〜8mm,可用专用半自动或自动点样器械喷雾法点样。点间距离可视斑点扩散情况以相邻斑点互不干扰为宜,一般不少于8mm,高效板供试品间隔不少于5mm。
(3)展开将点好供试品的薄层板放入展开缸中,浸入展开剂的深度为距原点5mm为宜,密闭。除另有规定外,一般上行展开8〜15cm,高效薄层板上行展开5〜8cm。溶剂前沿达到规定的展距,取出薄层板,晾干,待检测。
展开前如需要溶剂蒸气预平衡,可在展开缸中加入适量的展开剂,密闭,一般保持
15〜30分钟。溶剂蒸气预平衡后,应迅速放入载有供试品的薄层板,立即密闭,展开。如需使展开缸达到溶剂蒸气饱和的状态,则须在展开缸的内壁贴于展开缸高、宽同样大小的滤纸,一端浸入展开剂中,密闭一定时间,使溶剂蒸气达到饱再如法展开
显色与检视有颜色的物质可在可见光下直接检视,无色物质可用喷雾法或浸渍法以适宜的显色剂显色,或加热显色,在可见光下检视。有荧光的物质或显色后可激发产生荧光的物质可在紫外光灯(365nm或254nm)下观察荧光斑点。对于在紫外光下有吸收的成分,可用带有荧光剂的薄层板(如硅胶GF254板),在紫外光灯254nm下观察荧光板面上的荧光物质猝灭形成的斑点。
记录薄层色谱图像一般可采用摄像设备拍摄,以光学照片或电子图像的形式保存。也可用薄层扫描仪扫描或其他适宜的方式记录相应的色谱图。
系统适用性试验
按各品种项下要求对实验条件进行系统适用性试验,即用供试品和标准物质对实验条件进行试验和调整,应符合规定的要求。
比移值(Rf)系指从基线至展开斑点中心的距离与从基线至展开剂前沿的距离的比值。
R基线至展开斑点中心的距离
f基线至展开剂前沿的距离
除另有规定外,杂质检查时,〜。
检出限系指限量检查或杂质检查时,供试品溶液中被测物质能被检
出的最低浓度或量。一般采用已知浓度的供试品溶液或对照标准溶液,与稀释若干倍的自身对照标准溶液在规定的色谱条件下,在同一薄层板上点样、展开、检视,后者显清晰可辨斑点的浓度或量作为检出限。
(3)分离度(或称分离效能)鉴别时,供试品与标准物质色谱中斑点均应清晰分离。当薄层色谱扫描法用于限量检查和含量测定时,要求定量峰与相邻峰之间有较好的分离度,分离度(R)的计算公式为:
R=2(d2-d1)/(W1=W2)
式中d2为相邻两峰中后一峰与原点的距离;
d1为相邻两峰中前一峰与原点的距