文档介绍：1 宫颈腺癌中 HPV16/1 8 感染与 COX 拟2 蛋白表达的关系作者:王喜梅, 李树平, 舒筱灿,吴勇军,孙雷, 郑仁恕, 湛丽【摘要】目的探讨 16、 18 型人乳头瘤病毒( HPV16/18 ) 在宫颈腺癌发生发展中的作用, 分析 HPV16/18 感染与环氧化酶拟2( COX 拟2 )蛋白表达的关系。方法采用组织微阵列技术结合原位杂交和免疫组化(SP 法) 检测 24 例慢性宫颈炎和 86 例宫颈腺癌 HPV16/18 DNA 和 COX 拟2 蛋白表达情况。结果 HPV16/18 DNA 和 COX 拟2 蛋白在宫颈腺癌中的阳性表达率分别为 % 与 % ,均显著高于慢性宫颈炎组织 % 与 % ( )。 HPV16/18 感染与宫颈腺癌的病理分级和组织学类型无关, 但与 COX 拟2 表达呈正相关( )。 COX 拟2 表达与宫颈腺癌的病理分级有关,G3 组 COX 拟2 蛋白阳性表达率明显高于 G1 组( )。 COX 拟2 表达与宫颈腺癌组织学类型无明显相关性( P> )。结论宫颈腺癌的发生与 HPV16/1 8 感染及 COX 拟2 蛋白表达异常相关,宫颈腺癌中 COX 拟2 高表达与 HPV16/18 感染有一定相关性,二者可能协同作用导致宫颈腺癌恶性发展。 2 【关键词】宫颈腺癌 HPV16/18 COX 拟2 原位杂交; 免疫组化 The Relationship between HPV16/18 Infection and COX 拟2 ProtEin Expression in Cervical Adenocarcinoma Key words : Cervical adenocarcinoma;HPV16/18;COX 拟 2;In situ hybridization;Immunohistochemistry 人乳头瘤病毒( Human papilloma virus,HPV ) 感染已被公认为是宫颈癌的主要病因,人宫颈癌细胞中表达的 HPV 瘤基因涉及宫颈上皮的转化和永生, 且为增生性病变向恶性演进所必需。与宫颈肿瘤相关的 HP V有20 余种,其中 HPV16/1 8 在宫颈腺癌的检出率明显高于其他类型。环氧化酶拟2 (Cyclooxygenase 拟 2,COX 拟 2) 是一种诱导型酶,可在多种因子刺激下产生, 它与多种肿瘤的细胞增殖、抗细胞凋亡和肿瘤血管形成等密切相关。我们通过自制组织微阵列对 24例慢性宫颈炎和 86 例宫颈腺癌组织进行原位杂交和免疫组化检测, 探讨 HPV16/18DNA 与 COX 拟2 蛋白表达在宫颈腺癌发生发展中的作用,分析 HPV16/18 感染与 COX 拟2 蛋白表达的关系。 3 1 资料与方法 临床资料选取大连市妇产医院病理科、大连医科大学病理中心及湖南省肿瘤医院病理科 1999 ~ 2004 年保存的宫颈腺癌石蜡标本 86例, 患者年龄 25~ 72岁, 平均 岁, 全部病例均经病理专家复诊证实并按《诊断外科病理学》标准[1] 进行组织学分类和病理分级。组织学类型:宫颈内膜型腺癌 52 例, 子宫内膜样腺癌 13例, 透明细胞腺癌 18例, 浆液性乳头状腺癌 3 例。病理分级: G1 31 例, G2 33 例, G3 22例。另取 24 例慢性宫颈炎组织作为正常对照。所有标本经 10% 甲醛固定,石蜡包埋。 组织微阵列制作参照王喜梅等[2] 制作方法自制组织微阵列,主要步骤:①用自制打孔针在包埋盒内进行手工单孔制胚, 根据实验标本量排成 8×6 孔数的长方形阵列。②显微镜下观察 HE 片并在供体石蜡标本上准确圈出取材部位。③用自制取材针在供体蜡块上钻取深约 2~ 3mm 的组织条植入已打孔的受体蜡 4 模,置( 52±1)℃烤箱内连续烘烤 2~ 3h ,使供体组织条与受体蜡模完全融为一体, 见图 1。④将已制备好的组织微阵列连续 4μm 厚切片, 贴片后于 37℃恒温箱中放置 12h , 常温保存备用。 原位杂交 HPV16/18 原位杂交检测试剂盒(含生物素标记的 HPV16/18 探针)购自福建泰普生物科学有限公司。杂交/ 检测主要步骤: 切片脱蜡水化; 加蛋白酶 K, 37℃孵育 18min ; 梯度酒精脱水; 每张切片加入 10μl 的生物素化探针, 并盖上盖玻片; 95℃变性 10 min ; 37℃下湿盒中杂交 10h ;去垢剂洗涤液浸片 15min 去盖玻片;加 SP 拟 AP 结合物, 37℃孵育 25 min ;加酶底物 BCIP/NBT 室温暗盒显色 15 min ;核固红复染;水性封片剂封片。 免疫组化标记免