文档介绍：一、实验目的
学****高效液相色谱仪器的基本使用方法。
理解和掌握高效液相色谱分离分析基本原理。
学会用外标法和校正归一化法进行色谱定量分析。
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二、HPLC 简介
1967年，高效液相色谱法(high-p----是由具有光学活性的单体，固定在硅胶或其它聚合物上制成手性固定相，来实现外消旋物的广泛分离。
特点：具有专一性、通用性不广。
价格较贵。
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紫外吸收检测器（Ultraviolet Visible Detector，UVD） 目前在HPLC中应用最广泛的检测器。包括：
可变波长紫外检测器（VWD）
二极管阵列检测器（DAD）
荧光检测器（Fluorescence Detector，FD）
示差折光检测器（Refractive Index Detector，RID）
4、液相色谱检测器
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The Good User
下列优良/常规实验操作能够延长仪器寿命：
流动相和样品进行过滤。
保证溶剂的相溶性。
仪器使用完毕，冲洗整个系统，去掉盐份，防止污染。
对仪器进行定期维护和保养。
定期使用甲醇或异丙醇冲洗系统。
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色谱过程：在有互不相溶的两相——流动相和固定相的体系中，当两相作相对运动时，第三组分（即溶质或吸附质）连续不断地在两相之间进行分配的过程。
由于流动相、固定相以及溶质混合物性质的不同，在色谱过程中溶质混合物中的各组分表现出不同的色谱行为，从而使各组分彼此相互分离。
四、基本分离原理
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色谱分析法的实质：不同溶质分子因结构不同而与流动相及固定相的相互作用力不同，从而引起在色谱柱内运行过程中作用机理的差异。经过柱内多次作用的叠加后在宏观上引起其在柱内停留时间（保留时间）的差异，形成事实上的分离。
基本分离原理
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主要色谱类型
分配色谱：
液液分配色谱（Liquid-liquid partition chromatography）
化学键合相色谱（Chemically bounded phase chromatography, CBPC）
反相离子对色谱
液-固吸附色谱 （Liquid-solid adsorption chromatography, LSAC）
离子交换色谱（Ion-exchange chromatography）
空间排阻色谱（Size-exclusion chromatography）
亲和色谱法（Affinity chromatography）
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分配色谱
反相分配色谱：流动相极性＞固定相极性
正相分配色谱：流动相极性＜固定相极性
反相：固定相：C18, C8
流动相：水，甲醇，乙***等极性溶剂的混合溶剂
适合极性小的芳香族化合物
正相：固定相：-CN, -NH2
流动相：烷烃，异丙醇，四氢呋喃等的混合溶剂
适合于极性差异大的化合物
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液相色谱流动相
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液相色谱分析中，在紫外区有明显吸收，可以利用紫外检测器进行检测，其工作原理是Lambert-Beer定律。
五、基本检测原理
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定性定量分析的原理
用标准物比对法定性：特定组分在同色谱条件下有不变的保留值(时间、体积等)，可将之与已知纯物质的相应保留值作比对的方法进行定性分析。
三聚******
三聚***酸
猪肉中三聚******和三聚***酸的分析
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用外标法定量：以不同量标准样品进样得到峰面积，然后作图得标准曲线，求出回归方程，得到相关系数。然后进样得到被测试样的峰面积从曲线中查到含量。
方法适用于样品复杂，但只对部分组分感兴趣时。
定性定量分析的原理
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校正归一化法定量：因不同组分的紫外吸收情况不同，等量样品的吸光度值不相等。因而需要采用校正归一化法定量:
方法适用于样品不很复杂，且部分组分都能流出色谱柱并在检测器上有响应时。
定性定量分析的原理
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Agilent-1100液相色谱仪：
四元高压泵
C18色谱柱
手动进样器
可变波长紫外检测器
色谱工作站
六、实验内容
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实验步骤——I
打开计算机启动“bootp”文件，然后打开仪器电源建立计算机和仪器的