文档介绍：1 N拟乙酰半胱氨酸对镉致人胚肾细胞凋亡拮抗作用【摘要】目的探讨 N拟乙酰半胱氨酸(N拟 acetyl cystEine,NAC) 对***化镉所致人胚肾(human embryonic kidney,HEK) 细胞凋亡的拮抗作用。方法应用四***偶氮噻唑蓝(MTT) 比色法和流式细胞术(flowcytometry,FCM) 检测不同 CdCl2 浓度(0, 10, 20, 40, 80μ mol/L) 处理以及不同浓度 NAC(1 ,2,4, 8mmol/L) 和镉联合作用对 HEK 细胞相对存活率和凋亡率的影响。结果单纯染镉时,与对照组(0μ mol/L) 比较, 20, 40, 80μ mol/L CdCl23 组 HEK 细胞相对存活率明显降低() , HEK 细胞凋亡率明显升高() ; NAC 与镉联合作用时,与 40μ mol/L CdCl2 比较, 40μ mol/L CdCl2+4 , 8mmol/L NAC 2组 HE K 细胞相对存活率明显提高, 40μ mol/L CdCl2+2 ,4, 8mmol/L NAC3 组 HEK 细胞凋亡率明显降低。结论一定浓度***化镉可引起 HE K 细胞凋亡增加, NAC 可以拮***化镉引起的细胞凋亡。【关键词】镉镉(Cadmium,Cd) 在环境中不能降解,最终通过食物链转 2 移到人体,其生物半减期长达 10~ 30 年,故在机体中长期蓄积而造成毒作用〔1〕。镉中毒所致机体损伤机制十分复杂且尚不明确。镉可通过细胞内钙超载、基因表达异常与氧化应激等多种途径引起细胞凋亡。其致细胞凋亡的机制与过程不完全相同,有研究显示〔 2,3〕,镉致肝、肾细胞损伤与细胞凋亡关系密切。 N拟乙酰半胱氨酸(NAC) 作为一种巯基供给体,主要是一种抗氧化剂,具有抗细胞凋亡作用。本实验研究不同浓度的镉对人胚肾细胞存活力、凋亡率的影响以及 NAC 对染镉人胚肾细胞凋亡的影响,为镉中毒的发病机制和防治研究提供依据。 1 材料与方法 1杄1 主要化学试剂***化镉(CdCl2 ) ,优级纯; DMEM 培养液;四***偶氮噻唑蓝(MTT) ;碘化丙啶(PI) ; 胎牛血清;胰蛋白酶。 1杄2 主要仪器 BB1 5型 CO 2 恒温培养箱(德国 Heraeu s 公司); BD 拟 FACScan 流式细胞仪, SUNRISE 酶标仪(瑞典 Tecar 公司)。 1杄3 人胚肾(HEK) 细胞的培养将 HKE 细胞接种于培 3 养瓶中,用胎牛血清(DMEM) 培养液进行培养,每天换液 1 次。培养条件: 95%O2 , 5%CO2 , 37℃。 1杄4 HEK 细胞活力的测定参照四***偶氮噻唑蓝比色法(MTT) 〔4〕进行。将长成平层的 HEK 细胞用 % 胰酶消化, 制成单细胞悬液, 调整细胞密度为 2× 105 个/ml , 接种于 96 孔板培养 24h ,待细胞贴壁后分别以不同浓度的 CdCl2(0 , 10, 20, 40, 80μ mol/L) 处理和 40μ mol/L CdCl2+1 , 2,4, 8mmol/L NAC 处理, 每个剂量设 6 个复孔, 37℃孵育 3h 后,每孔加入 15μl MTT(5mg/ml) 继续培养 4h 后吸弃全部培养液, 每孔加入 150 μl 二***亚矾