文档介绍：Pfu DNA聚合酶
使用方法
我们推荐您使用本公司免费赠送的PCR染料，一是使扩增反应更趋优化；二 是扩增完毕无需再加上样染料，可直接上样电泳。
建议在0. 2ml或0. 5ml PCR反应管中加入下列成分：
20m反应体系
Pfu DNA聚合酶
使用方法
我们推荐您使用本公司免费赠送的PCR染料，一是使扩增反应更趋优化；二 是扩增完毕无需再加上样染料，可直接上样电泳。
建议在0. 2ml或0. 5ml PCR反应管中加入下列成分：
20m反应体系
som反应体系
DNA模板
5~50ng
lOTOOng
上游引物
10~20pniol
20~50pmol
下游引物
10~20pmol
20~50pmol
Pfu DNA聚合酶
1~1. 5U
2~3U
10 X Pfu缓冲液
2P1
5时
PCR染料
2P1
5P1
dNTPs (10mM)
0. 5P1
1M1
补超纯水至20皿或50P1,充分混匀后短暂离心。若基因扩增仪不防蒸发, 加入1~2滴石腊油。
推荐的PCR扩增条件（仅供参考）：
94 °C
2. 5min
94 °C
45sec 、
50-65 °C
lmin r 25~35 Cycles
72 °C
1 r・J
/
72 °C
5~10min
常见问题解答
使用Pfu可以扩增多长的片段？
对于简单的模板，Pfu应该可以很好的扩增3kb以下的片段。扩增更长片段 时，能否成功扩增主要与模板和引物的设计有关。
使用Pfu进行PCR扩增后的PCR产物能否进行TA克隆？
不能直接进行TA克隆。首先要将PCR产物进行纯化，然后在dATP存在条件 下用Taq酶72°C处理15分钟进行3'末端加A处理，再与TA载体连接。
用同单位的Pfu和Taq扩增，为什么Pfu扩增效率比Taq酶低? 因为高保真性能的Pfu聚合酶具有
3'到5,核酸外切酶的活性，扩增过程中如 果产生了错配的碱基，它可以将其切掉，从而保证了扩增的准确性。正是由 于此酶具有核酸外切酶的功能，往往扩增效率比Taq要低，而且还容易降解 引物，因而在设置PCR反应时，应最后加入Pfu酶为好。
四种耐热DNA聚合酶比较
耐热聚合酶
特点及应用
Taq DNA Polymerase
延伸速度最快的耐热DNA聚合酶，理想状态下为2~4kb/mino 可以很好的扩增lOkb以下的DN***段。
用于普通PCR扩增，其PCR产物含3’端单个dA,能进行TA 克隆。
Taq-red