文档介绍：乙肝病毒核酸扩增荧光检测
1．目的：保证 HBV DNA 检测结果准确、可靠。
2．适用范围：HBV DNA 的 TaqMan 荧光定量检测，标本类型为血
清。
3．负责人：乙肝病毒核酸扩增荧光检测
1．目的：保证 HBV DNA 检测结果准确、可靠。
2．适用范围：HBV DNA 的 TaqMan 荧光定量检测，标本类型为血
清。
3．负责人：操作人：
4．原理：本试剂盒用一对乙型肝炎病毒特异引物和一条乙型肝炎
病毒特异性荧光探针，PCR 反应液，耐热 DNA 聚合酶（Taq 酶），
四种核苷酸单体（dNTPs）等成分，再用 PCR 体外扩增法检测丙型
肝炎病毒 cDNA。
5．性能参数：检出低值＜1×103基因拷贝/ml。
6．标本要求：
（1）标本类型：血清。
（2）标本采集：见标本采集手册。
（3）标本储存和运输：室温放置不超过 8 小时，4-8℃不超过
72 小时，-20℃保存期 6 个月，应避免反复冻融。室温运输。
（4）标本拒收状态：细菌污染、严重溶血或脂血标本不能作测
定。
7．容器和添加剂类型：无菌离心管和无菌真空管8．所需设备：ABI GeneAmp 5700、台式高速离心机、混匀器、冰
箱（4℃、-20℃）、生物安全柜、紫外灯
9．试剂：DNA 提取液（500μl/管）2 管；HBV-PCR 反应液（未贴
标签管）20 管；阳性定量质控标准品（1×108 基因拷贝/ml）（50
μl/管）1 管；阴性质控品（250μl/管）1 管。
10．校准程序（计量学溯源性）：送深圳市计量检测所校准。
11．程序步骤:：
标本处理：取血清标本 40μl，加等量 DNA 提取液打匀。（提取
液内含不溶于水的物质，取样时需用加样器充分混匀后吸取。如出现
因吸头嘴部太细不能吸取或取样后堵塞吸头的现象，可先用洁净无污
染的剪刀将吸头嘴部剪去一截。）沸水浴 10 分钟（误差不超过 1 分钟），
（为保证病毒颗粒充分裂解可转至 4℃静置 8~12 小时）。10000rpm 离
心 5 分钟，取上清 2μl 做 PCR 反应。
标准品稀释和处理：将阳性定量质控标准品（1×108 基因拷贝
/ml）6000rpm 离心数秒标示为 108，另取 4 支灭菌新离心管，
分别加入 45μl 阴性质控品，依次标示为 107~104。吸取 108 管 5μl
至 107 管，用加样器反复混匀后换新吸头取 5μl 至 10