文档介绍：1
2012 细胞工程实验报告
细胞工程试验报告要求：
1、因需上报细胞工程试验成果，试验报告要求每人一份。 2、请使用试验报告纸、手写（不能打印）。
试验1 细胞培育室的设置和无菌操作
的光滑度。特别留意刷洗瓶角部位。酸浸之前要把洗涤剂冲干净。
③浸酸：将器皿浸泡于清洁液24h，如急用也不得少于4h。清洁液由重铬酸钾、浓硫酸及蒸馏水配制而成，具有很强的氧化作用，去污力气很强。经清洁液浸泡后，玻璃器皿残留的末刷洗掉的微量杂质可被完全清除。
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④冲洗：先用自来水充分冲洗，吸管等冲流10min，瓶皿需每瓶灌满、倒掉，反复10次以上。然后再经蒸馏水漂洗3次,不留死角。晾干或烘干备用。对已用过的器皿，凡污染者必先经煮沸30min或放3%盐酸中浸泡过夜，未污染者可不需灭菌处理，但仍要刷洗、清洁液浸酸过夜，冲洗等。
（2）塑料器皿清洗
自来水充分浸泡→冲洗→2%Na0H浸泡过夜→自来水冲洗→2%~5%盐酸浸泡30min→自来水冲洗→蒸馏水漂洗3次→晾干→紫外线照射30min(或先用75%酒精浸泡、擦拭，再用紫外线照射30min)。凡能耐热的塑料器皿，(℃)高压灭菌。
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（3）胶塞等橡胶类处理
新购置者先经自来水冲洗→2%NaOH煮沸15min→自来水冲洗→2%~5%HCl煮沸15min→自来水冲洗5次以上→蒸馏水冲洗5次以上→蒸馏水煮沸10min，倒掉沸水让余热烘干瓶塞等。或蒸馏水冲洗晾干，。
（4）金属器械的清洗
新购进的金属器械常涂有防锈油，先用沾有汽油的纱布擦去油脂，再用水洗净，最终用酒精棉球擦拭，晾干。用过的金属器械应先以清水煮沸消毒，再擦拭干净。使用前以蒸馏水煮沸10min，。
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（5）除菌滤器的处理
用过的滤器将滤膜去除，用三蒸水充分洗净残余液体，置干燥箱中烘干备用。
2．包装
包装的目的是防止消毒灭菌后再次患病污染，所以经清洗烤干或晾干的器材，应严格包装后再行消毒灭菌处理。包装材料常用包装纸、牛皮纸、硫酸纸、棉布、铝饭盒、玻璃或金属制吸管筒、纸绳等。包装分为局部包装和全包装两类，前者用于较大瓶皿，一般用硫酸纸和牛皮纸将瓶口包扎好；后者适于较小培育瓶皿、吸管、注射器、金属器械和胶塞等，以下为常用瓶皿、吸管、无菌衣帽等的包装方法，其它物品可参照处理。
①瓶类：硫酸纸罩以瓶口,外罩二层牛皮纸用绳扎紧。
②小瓶皿、胶塞、刀剪等器械可装人饭盒，饭盒再以牛皮纸包好，绳扎好。
③吸管、滴管口用脱脂棉塞上(不要太紧或太松)装人消毒筒内，滤器、滤瓶、橡皮管等都要用牛皮纸包好瓶口等，外罩一层牛皮纸包好，再用包布包好。
④无菌衣、帽、口罩，均以牛皮纸或包布包好，绳扎好。
3．消毒灭菌
严格的消毒灭菌对保证细胞培育的成功是极为重要的，其方法分为物理法和化学法两类。前者包括干热、湿热、滤过、紫外线及射线等，后者主要指使用化学消毒剂等。
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四、【试验报告】
写出细胞工程试验室常用消毒灭菌的方法和适用范围。
①热灭菌：玻璃器皿，160~170℃，90~120min或180℃45~60min。
②蒸气灭菌：用于玻璃器皿、滤器橡胶塞、解剖用具、耐热塑料器具、受热不变性的溶液等，不同物品其有效灭菌压力和时间不同，如培育用液、橡胶制品、塑料器皿等用68kPa(115℃)高压灭菌10min；布类、玻璃制品、金属器械等用103kPa(℃)高压灭菌15~20min。
③滤过除菌：适于含有不耐热成分的培育基和试剂的除菌，，用此滤膜过滤两次，可使支原体达到某种程度的去除，但不能除去病毒。
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2 冻存
①消化细胞（同细胞传代），将细胞悬液收集至离心管中。 ②1000rpm离心10分钟，弃上清液。
③沉淀加含10%DMSO爱惜液的有血清培育液，计数，调整至5×106/ml左右。 ④将悬液分至冻存管中，每管1 ml。 ⑤将冻存管口封严。
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⑥贴上标签，写明细胞种类，冻存日期。冻存管外拴一金属重物和一细绳。
⑦按下列挨次降温：室温→4℃（20分钟〕→冰箱冷冻室（30分钟）→低温冰箱（－30℃ 1小时）→气态氮（30分钟）→液氮。